[发明专利]一种小鼠2型糖尿病模型的构建及评价方法

说明书

本发明涉及一种小鼠2型糖尿病模型的建立及采用离体组织灌流实验评价该模型的方法，该造模方法采用雌性去势昆明小鼠构建2型糖尿病模型，同时采用离体组织灌流实验检测不同组小鼠离体组织的耗糖量以判断胰岛素抵抗的发生，实验条件易于控制、实验周期短，为药物在糖尿病的预防、诊治和糖代谢研究中提供了理论依据。

【技术领域】

本发明属于医疗评价、检测技术领域，具体涉及小鼠2型糖尿病模型的建立及采用离体组织灌流实验评价该模型的方法。

【背景技术】

2型糖尿病是慢性疾病，患者进食量、进水量和血糖升高，最明显的临床特征是胰岛素抵抗伴一定程度的β细胞衰竭，最常见的是具有肥胖特征。胰岛素抵抗特征也是2型糖尿病与1型糖尿病最大的区别之处。缺乏良好的胰岛素抵抗模型是研究2型糖尿病的一大难点。大量文献报道了构建大鼠2型糖尿病的造模方式，但对于小鼠的报道却并不多，也无确定统一的造模方案。有研究报道大鼠对链脲佐菌素的敏感性是小鼠的3-4倍，高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(30mg/kg体重)，Wistar大鼠出现胰岛素抵抗特征，但给予小鼠相似剂量的链脲佐菌素(35mg/kg体重)造模会有部分小鼠自我恢复，在我们的实验中也发现低剂量的链脲佐菌素诱导建立的糖尿病小鼠模型在第4周后血糖确有下降。有文献报道对C57BL/6J小鼠单次腹腔注射100mg/kg体重链脲佐菌素时可以成功构建2型糖尿病模型；也有实验通过对11周龄雄性 C57BL/6NTac小鼠腹腔注射两种浓度的链脲佐菌素成功构建2型糖尿病小鼠模型：第1天50mg/kg体重，第2天25mg/kg体重。C57BL小鼠虽含致糖尿病基因，成模率较高，但成本也较高，且造模得到的糖尿病类型多偏向 T1DM。昆明小鼠与人类胰腺相似，成本低，易饲养，实验结果稳定可靠，具有可重复性。因此我们的研究以昆明小鼠作为胰岛素抵抗动物模型。为了缩短造模时间，优化胰岛素抵抗模型，避免内源性孕激素和雌激素的干扰，明确模型的适用范围，筛选最佳方案，我们对雌性昆明小鼠进行了去势手术，采用高脂饮食联合不同剂量链脲佐菌素建立2型糖尿病模型。

【发明内容】

本发明的目的是提供一种小鼠2型糖尿病模型的构建方法，并采用离体组织灌流的方法对模型进行评价，以确认模型是否构建成功，依照该造模方法得到的小鼠2型糖尿病模型有助于临床雌激素相关性疾病发病机制分析及预防和治疗。为了实现上述目的，采用以下技术方案予以实现：

小鼠2型糖尿病模型的造模方法，包括以下步骤：

(1)将体重为22g-26g的雌性昆明小鼠在室内温度22℃-25℃，相对湿度 65％～70％的饲养室饲养7天；

(2)禁食不禁水并去掉垫料12h后于术前测量小鼠体重与血糖，在无菌条件下，进行去势手术，该去势手术即为卵巢切除术；

(3)术后恢复一周后，高脂饮食饲养小鼠4周后，每日腹腔注射30mg/kg 体重链脲佐菌素，连续3天，第4天注射80mg/kg体重链脲佐菌素。

上述小鼠2型糖尿病模型的评价方法，包括以下步骤：

(1)构建对照组，对照组小鼠构建步骤为选取体重为22g-26g的雌性昆明小鼠在室内温度22℃-25℃，相对湿度65％～70％的饲养室饲养7天，在无菌条件下，进行去势手术，去势手术恢复一周后高脂饮食饲养小鼠4周后，连续 4天腹腔注射与构建模型时注射的链脲佐菌素相同剂量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液；

(2)将构建的模型组与对照组继续高脂饮食喂养四周后，对两组小鼠进行离体心肌、腓肠肌和肝脏组织灌流实验判定胰岛素抵抗发生情况，若链脲佐菌素组小鼠离体心肌、腓肠肌和肝脏在胰岛素(终浓度为0.02U/mL)作用前和作用后，生理糖水平耗糖量显著低于对照组p0.05，且在高糖水平时也显著低于对照组 p0.05，则判定2型糖尿病胰岛素抵抗模型造模成功，否则判定造模失败。