[发明专利]分子开关调控型嵌合抗原受体细胞和抗体的组合及其应用

权利要求书

1.分子开关调控型嵌合抗原受体(CAR)多肽，其包含

(1)人源化抗P329G突变scFv序列，其中所述scFv序列包含能够特异性结合包含P329G突变的抗体Fc结构域，但不能特异性结合未突变的亲本抗体Fc结构域的如下序列：

(i)重链可变区，其包含根据Kabat编号的

(a)氨基酸序列RYWMN(SEQ ID NO：54)所示的重链互补决定区CDR H1、或所述CDR H1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；

(b)氨基酸序列EITPDSSTINYAPSLKG(SEQ ID NO：55)所示的CDR H2、或所述CDR H2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和

(c)氨基酸序列PYDYGAWFAS(SEQ ID NO：56)所示的CDR H3、或所述CDR H3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和

(ii)轻链可变区，其包含根据Kabat编号的

(d)氨基酸序列RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO：57)所示的轻链互补决定区(CDR L)1、或所述CDR L1的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；

(e)氨基酸序列GTNKRAP(SEQ ID NO：58)所示的CDR L2、或所述CDR L2的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；和

(f)氨基酸序列ALWYSNHWV(SEQ ID NO：59)所示的CDR L3、或所述CDR L3的不超过2个氨基酸变化或不超过1个氨基酸变化的变体；

其中所述氨基酸变化是氨基酸的添加、缺失或取代

(2)铰链区/间隔区，其选自

(i)(G₄S)_n、(SG₄)_n或G₄(SG₄)_n肽接头，其中“n”是1至10的整数，例如2至4的整数，例如SEQID NO：4、SEQ ID NO：5所示的序列；

(ii)IgG4间隔区(SEQ ID NO 6；ESKYGPPCPPCP)，或其具有至少80％的序列同一性的间隔区；

(iii)CD28铰链区(SEQ ID NO 7；IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP)，或其具有至少80％的序列同一性的间隔区。

(3)跨膜区(TM)，其选自

(i)CD28跨膜结构域或其具有1-5个氨基酸修饰的变体，例如，SEQ ID NO：8所示的序列或其具有1-2个氨基酸修饰的变体；

(ii)CD8跨膜结构域或其具有1-5个氨基酸修饰的变体，例如，SEQ ID NO：9所示的序列或其具有1-2个氨基酸修饰的变体；

(4)共刺激信号结构域(CSD)其选自：

(i)4-1BB共刺激结构域或其具有1-5个氨基酸修饰的变体，例如，SEQ ID NO：11所示的序列或其具有1-2个氨基酸修饰的变体；

(ii)CD28共刺激结构域或其具有1-5个氨基酸修饰的变体，例如，SEQ ID NO：10所示的序列或其具有1-2个氨基酸修饰的变体，例如，SEQ ID NO：12所示的序列；

(5)刺激信号结构域(SSD)，为CD3ζ信号传导结构域或其具有1-10个氨基酸修饰的变体，例如，SEQ ID NO：13所示的序列或其具有1-10个、1-5个氨基酸修饰的变体；

优选地，所述CAR多肽包含

(1)人源化抗P329G突变scFv序列，其中所述scFv序列包含能够特异性结合包含P329G突变的抗体Fc结构域，但不能特异性结合未突变的亲本抗体Fc结构域的如下序列：

(i)重链可变区，其包含根据Kabat编号的

(a)氨基酸序列RYWMN(SEQ ID NO：54)所示的CDR H1；

(b)氨基酸序列EITPDSSTINYAPSLKG(SEQ ID NO：55)所示的CDR H2；和

(c)氨基酸序列PYDYGAWFAS(SEQ ID NO：56)所示的CDR H3；和

(ii)轻链可变区，其包含根据Kabat编号的

(d)氨基酸序列RSSTGAVTTSNYAN(SEQ ID NO：57)所示的CDR L1；

(e)氨基酸序列GTNKRAP(SEQ ID NO：58)所示的CDR L2；和

(f)氨基酸序列ALWYSNHWV(SEQ ID NO：59)所示的CDR L3；

例如，(i)重链可变区，其包含SEQ ID NO：2的序列或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列，和

(ii)轻链可变区，其包含SEQ ID NO：3的序列或与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的序列；

例如，(i)重链可变区，其包含SEQ ID NO：2的序列，和

(ii)轻链可变区，其包含SEQ ID NO：3的序列；

(2)铰链区/间隔区，其选自

(i)(G₄S)_n、(SG₄)_n、(G₄S)_n或G₄(SG₄)_n肽接头，其中“n”是1至10的整数，例如2至4的整数，例如SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5所示的序列；

(ii)IgG4间隔区(SEQ ID NO 6；ESKYGPPCPPCP)，或其具有至少90％的序列同一性的间隔区；

(iii)CD28铰链区(SEQ ID NO 7；IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP)，或其具有至少90％、至少95％的序列同一性的间隔区。

(3)跨膜区(TM)，其选自

(i)SEQ ID NO：8所示的CD28跨膜结构域或其具有1个氨基酸修饰的变体；

(ii)SEQ ID NO：9所示的CD8跨膜结构域或其具有1个氨基酸修饰的变体；

(4)共刺激信号结构域(CSD)其选自：

(i)SEQ ID NO：11所示的4-1BB共刺激结构域或其具有1个氨基酸修饰的变体；

(ii)SEQ ID NO：10所示的CD28共刺激结构域或其具有1个氨基酸修饰的变体，例如，SEQ ID NO：12所示的序列；

(5)刺激信号结构域(SSD)，为SEQ ID NO：13所示的CD3ζ信号传导结构域或其具有1个氨基酸修饰的变体；

其中所述氨基酸修饰是氨基酸的添加、缺失或取代。