[发明专利]一种马铃薯种薯病毒检测方法

权利要求书

1.一种马铃薯种薯病毒检测方法，其特征在于，关于马铃薯种薯的病毒检测具体操作步骤如下：

S1：首先，工作人员准备待检测的马铃薯种薯，然后对其进行外观分类挑选，将马铃薯种薯外观比较完整没有残缺的设为一组，并且将其挑选为十个，同时对其依次进行数字编号，然后将马铃薯种薯外观有残缺且有虫蛀的设为一组，并且将其也挑选为十个，同时也对其依次进行数字编号，总共设为两组；

S2：随后，工作人员将S1中分类的两组马铃薯种薯同时种植到恒温箱中的灭菌土中，并且将恒温箱内控制在适中的温度，伴随着马铃薯种薯的生长发育，将会长出真叶，此时工作人员对两组马铃薯种薯的真叶进行观察，对两组中真叶出现不健康有症状的进行标记；

S3：之后，工作人员准备一份酶联板，并且对其进行清洗与消毒，然后配备一定比例的PBST缓冲液（PH7.4）、样品抽提缓冲液（PH7.4）、包被缓冲液（PH9.6）、酶标抗体稀释缓冲液（PH7.4）和底物缓冲液（PH9.8）；

S4：工作人员用包被缓冲液将马铃薯X病毒抗体进行稀释，随后将其按照一定比例加入至酶联板的孔洞中，在37℃下放置3h，随后将其取出，并且最终对酶联板的孔洞进行全面的清洗；

S5：工作人员将两组有症状的真叶分别加入至抽提缓冲液中，并对其进行搅拌以及研磨成浆液，随后在对其进行离心，之后取出，此时呈现出的上清液即为制备好的检测样品，然后将制备好的检测样品溶液加入至PBST缓冲液中并且对其进行搅拌混合，最终置于为37℃环境下放置4h；

S6：工作人员将酶标抗体稀释缓冲液进行稀释，并且加入至酶联板中，在37℃的环境下放置4h，最终取出，随后对酶联板进行清洗，然后该溶液与S5步骤中的溶液混合，最终工作人员将底物缓冲液加入至混合溶液中，随后对其进行均匀搅拌混合，进而形成完全配好的样品检测溶液；

S7：最终工作人员对两组完全配好的样品检测溶液，利用酶联仪进行检测读取OD数据值，并且结合阴性对照OD值来进行判断，从而可以得出两组不同外观下，其马铃薯种薯含有X病毒的情况。

2.根据权利要求1所述的一种马铃薯种薯病毒检测方法，其特征在于：所述马铃薯病毒检测S2步骤中的恒温箱适中温度即为25℃左右，上下温度的变化幅度小于5℃。

3.根据权利要求1所述的一种马铃薯种薯病毒检测方法，其特征在于：所述马铃薯病毒检测S4步骤中的一定比例即为100μL/孔，并且上下浮动范围小于10μL。

4.根据权利要求1所述的一种马铃薯种薯病毒检测方法，其特征在于：所述马铃薯病毒检测S5步骤中在离心的时候，需要把控在10min，并且需要控制在质量为2000g。

5.根据权利要求1所述的一种马铃薯种薯病毒检测方法，其特征在于：所述马铃薯病毒检测S3步骤中，PSBT缓冲液的配置含量为氯化钠8g、磷酸氢二钠1.15g、磷酸二氢钾0.2g、氯化钾0.2g和吐温-20为0.5ml，并对上述物料进行混合，之后采用蒸馏水对其进行定容至1L，随后在4℃环境下储存。

6.根据权利要求1所述的一种马铃薯种薯病毒检测方法，其特征在于：所述马铃薯病毒检测S3步骤中样品抽提缓冲液的配置含量PBST为1L、亚硫酸钠1.3g、PVP20g、叠氮钠0.2g，进行混合搅拌，并且在4℃下储存。

7.根据权利要求1所述的一种马铃薯种薯病毒检测方法，其特征在于：所述马铃薯病毒检测S3步骤中包被缓冲液的配置为碳酸钠1.59g、碳酸氢钠2.93g和叠氮钠0.2g，之后用蒸馏水定容至1L，混合搅拌之后在4℃下保存。

8.根据权利要求1所述的一种马铃薯种薯病毒检测方法，其特征在于：所述马铃薯病毒检测S3步骤中酶标抗体稀释缓冲液的配置为PSBT溶液1L、脱脂奶粉2g、PVP19g、叠氮化钠0.2g，混合之后在4℃下储存。

9.根据权利要求1所述的一种马铃薯种薯病毒检测方法，其特征在于：所述马铃薯病毒检测S3步骤中底物缓冲液的配置为氯化镁0.1g、叠氮钠0.2g和二乙醇胺100ml，然后溶于800ml的蒸馏水中，之后再用HCL调为PH值到10，之后用蒸馏水定容至1L，混合搅拌之后在4℃下保存。