[发明专利]一种携带TMVP1和tBid的溶瘤腺病毒重组体、其构建方法及应用在审
| 申请号： | 202111442797.7 | 申请日： | 2021-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN114317462A | 公开（公告）日： | 2022-04-12 |
| 发明（设计）人： | 马丁;陈世民;杨帆;高庆蕾;纪腾 | 申请（专利权）人： | 武汉凯德维斯生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/11;C12N15/12;C12N15/90;C12N15/861;A61K35/761;A61K38/17;A61K47/64;A61K48/00;A61P35/00;A61P35/04;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京轻创知识产权代理有限公司 11212 | 代理人： | 姚晓丽 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 携带 tmvp1 tbid 溶瘤腺 病毒 重组 构建 方法 应用 | ||
1.一种携带TMVP1和tBid的溶瘤腺病毒重组体，其特征在于，该携带TMVP1和tBid的溶瘤腺病毒重组体为Ad5/Δ27/TMVP1/ΔADP-tBid，其核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示，是在人类5型腺病毒基因的E1A保守序列2区缺失第920nt-946nt区域如SEQ ID NO.1所示的27个碱基，再在Hexon高变区5的第19641nt-19655nt区域插入如SEQ ID NO.15所示的编码肿瘤靶向肽TMVP1的基因序列，同时缺失E3区位于ADP基因第29477nt-29714nt区域，构成缺失区，再在所述缺失区插入如SEQ ID NO.22所示的线粒体凋亡肽tBid的基因序列并引入Cla1酶切位点。
2.权利要求1所述的携带TMVP1和tBid的溶瘤腺病毒重组体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：人类5型腺病毒基因的定向缺失
利用基因合成和同源重组的方式定向缺失人类5型腺病毒基因的E1A保守序列2区第920nt-946nt如SEQ ID NO.1所示的27个碱基，获得定向缺失后的人类5型腺病毒基因Ad5/Δ27；
步骤2：制备Ad5/Δ27/TMVP1
在步骤1获得的定向缺失后的人类5型腺病毒基因的Hexon高变区5的第19641nt-19655nt区域，插入如SEQ ID NO.15所示的编码肿瘤靶向肽TMVP1的基因序列，获得Ad5/Δ27/TMVP1；
步骤3：制备携带TMVP1和tBid的溶瘤腺病毒重组体Ad5/Δ27/TMVP1/ΔADP-tBid
在步骤2获得的Ad5/Δ27/TMVP1的E3区位于ADP基因第29477nt-29714nt区域，构成缺失区，再在所述缺失区插入如SEQ ID NO.22所示的线粒体凋亡肽tBid的基因序列并引入Cla1酶切位点，即获得如SEQ ID NO.23所示的携带TMVP1和tBid的溶瘤腺病毒重组体Ad5/Δ27/TMVP1/ΔADP-tBid。
3.权利要求1所述的携带TMVP1和tBid的溶瘤腺病毒重组体在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
4.权利要求1所述的携带TMVP1和tBid的溶瘤腺病毒重组体在制备基因治疗载体中的应用。
5.权利要求1所述的携带TMVP1和tBid的溶瘤腺病毒重组体在制备改善备抗肿瘤化疗药物耐药性的药物中的应用。
6.权利要求1所述的携带TMVP1和tBid的溶瘤腺病毒重组体在制备抗肿瘤化疗药物增敏剂中的应用。
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