[发明专利]Akt1磷酸化PMS2蛋白在作为卵巢癌治疗靶点中的应用

权利要求书

1.一种Akt1磷酸化PMS2蛋白在作为卵巢癌治疗靶点中的应用。

2.一种实施如权利要求1所述的Akt1磷酸化PMS2蛋白在作为卵巢癌治疗靶点中的应用的鉴定Akt1磷酸化PMS2蛋白作为卵巢癌治疗靶点的方法，所述鉴定Akt1磷酸化PMS2蛋白作为卵巢癌治疗靶点的方法包括以下步骤：

步骤一，通过Western Blot检测活化Akt1和p-PMS2关系；

步骤二，检测p-PMS2 T156下调后卵巢癌细胞迁移能力的变化；

步骤三，检测p-PMS2 T156下调后卵巢癌细胞侵袭能力的变化；

步骤四，通过平板克隆法检测转染PMS2-T156A后卵巢癌细胞克隆形成能力的变化；

步骤五，通过流式细胞仪及WesternBlot检测转染PMS2-T156A卵巢癌细胞凋亡的影响。

3.如权利要求2所述的鉴定Akt1磷酸化PMS2蛋白作为卵巢癌治疗靶点的方法，其特征在于，步骤一中，所述通过WesternBlot检测活化Akt1和p-PMS2关系，包括：

(1)通过Western Blot检测卵巢癌细胞系p-Akt S473和p-PMS2 T156的表达情况；

(2)通过WesternBlot检测突变质粒PMS2-T156A转染效果；

(3)上调Akt1活性后，检测p-PMS2 T156表达情况。

4.如权利要求3所述的鉴定Akt1磷酸化PMS2蛋白作为卵巢癌治疗靶点的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述通过Western Blot检测卵巢癌细胞系p-Akt S473和p-PMS2 T156的表达情况，包括：

通过Western Blot法检测4种卵巢癌细胞株中P-Akt S473和p-PMS2 T156的表达情况，因Hela细胞中存在正常的MMR功能和异常活化的Akt1而作为阳性对照。

5.如权利要求3所述的鉴定Akt1磷酸化PMS2蛋白作为卵巢癌治疗靶点的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述通过Western Blot检测突变质粒PMS2-T156A转染效果，包括：

选取p-PMS2 T156高表达的A2780和SKOV3作为转染对象，通过Western Blot验证转染效果。

6.如权利要求3所述的鉴定Akt1磷酸化PMS2蛋白作为卵巢癌治疗靶点的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述上调Akt1活性后，检测p-PMS2 T156表达情况，包括：

选取A2780和SKOV3细胞作为实验对象，加入Akt1活化剂IGF-1上调p-Akt S473的表达，通过Western Blot法检测，验证Akt1对PMS2的作用。

7.如权利要求2所述的鉴定Akt1磷酸化PMS2蛋白作为卵巢癌治疗靶点的方法，其特征在于，步骤二中，所述检测p-PMS2 T156下调后卵巢癌细胞迁移能力的变化，包括：

细胞划痕实验转染PMS2-T156A后A2780和SKOV3迁移能力的改变，计算两细胞系各组划痕间隙融合率，间隙融合率＝(起始时间间隙宽度-终止观察时间间隙宽度)/起始时间间隙宽度；

步骤三中，所述检测p-PMS2 T156下调后卵巢癌细胞侵袭能力变化，包括：

通过transwell检测转染PMS2-T156A后A2780和SKOV3细胞侵袭能力的改变，计数膜中央部分和周围部分随机视野X100内侵袭细胞的数目；

步骤四中，所述通过平板克隆法检测转染PMS2-T156A后卵巢癌细胞克隆形成能力的变化，包括：

六孔板细胞培养10～14天后观察，将直径为3.5cm的六孔板分成若干10mm×10mm视野，随机选择4个视野计算细胞克隆数。