[发明专利]一种纳米疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种纳米疫苗及其制备方法和应用，采用本发明中的方法制得的纳米疫苗能顺序响应肿瘤弱酸微环境、可重塑肿瘤免疫抑制性微环境，并且可搭载多种治疗剂和抗原，为纳米疫苗平台的设计提供了新思路，能够用于肿瘤的联合免疫治疗。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种纳米疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，癌症免疫疗法在提高癌症治疗效果方面具有巨大潜力。在不同类型的癌症免疫治疗策略中，癌症疫苗因其引发肿瘤特异性免疫反应的能力而被广泛研究。尽管癌症疫苗在某些情况下表现出一定程度的抗肿瘤效率，但由于可溶性抗原的快速清除、抗原呈递细胞(APC)对抗原的内化不充分、树突状细胞(DCs)的成熟效率低、以及效应T淋巴细胞的活化和对肿瘤的浸润效率低等原因导致癌症疫苗的治疗效果不够满意。因此，制造一种具有表面正电荷激活和内源性刺激响应的、尺寸可变的抗原载体，其能够保护抗原免于降解并将抗原递送到DCs中以激活和扩增肿瘤特异性T细胞。

在癌症相关炎症的影响下，肿瘤微环境(TME)呈免疫抑制性状态，其通过各种负反馈机制损害了癌症疫苗的抗肿瘤效率。吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3-dioxygenase，IDO)是催化必需氨基酸L-色氨酸(L-tryptophan)降解为L-犬尿氨酸(L-kynurenine)的限速酶。已鉴定出许多实体肿瘤高表达IDO，导致色氨酸不可用和犬尿氨酸在肿瘤微环境中积累，这是使效应T细胞增殖和活性减弱、促进调节性T细胞(Treg)生长的重要机制，高度选择性的抑制剂NLG919通过阻断IDO介导的免疫抑制途径，被广泛用作IDO抑制剂。此外，肿瘤相关的巨噬细胞(TAMs)占肿瘤浸润免疫细胞的很大一部分。TAMs分为不同的功能表型，分别称为经典激活的巨噬细胞(M1型表型)和替代的激活巨噬细胞(M2型表型)。M1型TAMs过度表达主要组织相容性复合体I类和II类分子，它们在抗原呈递中起关键作用。相反，M2型TAMs发挥促肿瘤活性，并对不同的肿瘤决定因素(特别是低pH值)做出反应。M2型TAMs的浸润通常与肿瘤浸润、转移、血管生成、T细胞抑制和不良的临床预后相关。因此，靶向M2型TAM对于重塑免疫抑制性TME以改善T细胞介导的抗肿瘤免疫也是必不可少的。集落刺激因子(CSF-1)及其受体CSF-1R在M2样TAMs中过表达，被视为TAMs分化和存活的重要途径。BLZ-945是一种高选择性的CSF-1R抑制剂，通过阻断CSF-1R直接消耗TAMs，导致M2型TAMs浸润显著减少，肿瘤部位效应T细胞浸润增加。

阻断这些负调控途径，显示出重新激活由癌症疫苗引起的抗原特异性免疫反应的效果。然而，由于NLG-919和BLZ-945的溶解性差，它们在治疗递送中的应用受到极大限制。因此，基于纳米平台的递送系统对于同时装载多种药物并提高其生物利用度至关重要。基于这些研究背景，制造一种新型癌症纳米疫苗将具有重要的临床意义。这种新型的纳米疫苗可以有效地将肿瘤相关抗原(TAA)传递给DCs，全面重塑免疫抑制性TME为对免疫细胞更有利的环境，并且能够诱导随后的抗原特异性T细胞激活和增殖，以实现最大的抗肿瘤效应。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供一种纳米疫苗及其制备方法和应用，所得到的纳米疫苗能顺序性响应肿瘤微环境，重塑免疫抑制性的肿瘤微环境为对效应T细胞有利的环境，实现高效的肿瘤免疫治疗效果。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是，提供一种纳米疫苗及其制备方法和应用。纳米疫苗的制备方法，包括以下步骤：

S1：将杂化胶束、CSF-1R抑制剂和IDO抑制剂共溶于有机溶剂中，得混合溶液，然后于2～5℃下避光搅拌反应2～4h，得负载抑制剂的纳米粒子；

S2：将负载抑制剂的纳米粒子配制成溶液并向溶液中加入鸡卵清白蛋白，然后于4℃下震荡1～2h，即得。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。