[发明专利]一种丁香疫霉的特异性检测靶标Psyri_s00018g00015.1及其应用

说明书

本发明公开了一种丁香疫霉(Phytophthora syringae)的检测新靶标Psyri_s00018g00015.1及其检测引物、检测试剂盒和检测方法，该检测靶标Psyri_s00018g00015.1的蛋白序列如SEQ ID NO：1所示，编码该蛋白的DNA序列如SEQ ID NO：2所示。同时，本发明还公开了特异性检测靶标Psyri_s00018g00015.1的RPA检测技术的特异性引物及探针组合，其正向引物序列如SEQ ID NO：3所示，反向引物序列如SEQ ID NO:4所示，探针序列如SEQ ID NO：5所示。本发明发现了丁香疫霉新的检测靶标，为丁香疫霉的检测提供了新的检测途径，同时基于该靶标开发的RPA‑LFD检测引物和探针，能够实现丁香疫霉的特异性检测，灵敏度高。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种丁香疫霉的特异性检测靶标Psyri_s00018g00015.1及其应用。

背景技术

疫霉（Phytophthora）正式报道有100多个种, 许多疫霉都有严重危害农业生产安全的记录，可以说个个是农作物的毁坏者，轻则造成缺苗断垄，重则造成严重的产量损失，甚至绝产。因此，防止外来有害检疫性疫霉菌传入我国具有重要意义。丁香疫霉（P. syringae）是疫霉属病原菌，能够对寄主植物造成根腐、枝干流胶等症状，引起柑橘类果实褐腐，目前该病原菌广泛分布在全球各个盛产柑橘的地区，在我国尚未发现，是我国重要进境检疫对象。中国每年从国外进口大量柑橘类水果，包括葡萄柚、脐橙等，该病原菌有伴随进口产品进入我国的风险。2011 年天津口岸从美国脐橙上截获丁香疫霉（P. syringae），各地检疫机关多次从进口水果中发现该疫霉，2013 年和 2015年仅从美国进境水果上已分别截获6和14批次。

不同的靶标序列检测的特异性和灵敏度存在一定的差距，因选择的目标靶序列不同、片段大小不同，结果都会有很大差别。发掘特异性好的靶基因是目前丁香疫霉（P. syringae）检测技术的核心。靶标基因的选择要确保其在种内的不同菌株间的高度保守，而在种间变异性较高。发掘高信赖度特异性分子检测靶标并基于新靶标建立灵敏、准确的丁香疫霉（P. syringae）检测技术体系对提升对丁香疫霉的快速分子检测研究及其检测时所致病害早期诊断具有重要作用。

发明内容

针对现有技术中丁香疫霉生物学检测方法所需周期长、检测方法特异性差、灵敏度低的问题，本发明的目的是提供一种新的丁香疫霉的检测新靶标Psyri_s00018g00015.1及其靶标建立的RPA-LFD检测引物组合物。本发明另一目的是提供上述丁香疫霉的RPA-LFD检测方法。本发明建立的快速检测丁香疫霉的方法，通过特异性和灵敏度评价，可用于实际样品的检测，为丁香疫霉的现场检测提供一种灵敏、可靠的新方法。

为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：