[发明专利]基于指数扩增反应和Argonaute核酸酶的microRNA检测体系及方法

说明书

本发明公开了一种基于指数扩增反应和Argonaute核酸酶的microRNA检测体系及方法。本发明提供了一种基于指数扩增反应和Argonaute核酸酶的microRNA检测体系，microRNA检测体系包括：(a)向导DNA，向导DNA为采用指数扩增反应体系扩增目标物microRNA所获得的扩增产物；(b)Argonaute核酸酶；(c)检测探针，检测探针带有荧光基团和淬灭基团，且检测探针包括与采用指数扩增反应体系扩增目标物microRNA所获得的扩增产物互补的区域。本发明提供的microRNA检测体系实现了单碱基特异性的、高灵敏的miRNA检测，以及多重miRNA检测和miRNA分型分析。

技术领域

本发明涉及microRNA检测的技术领域，具体涉及一种基于指数扩增反应和Argonaute核酸酶的microRNA检测体系及方法。

背景技术

成熟的microRNA(miRNA)是一类长度为18-28个碱基的单链非编码RNA分子，在免疫系统、细胞的生长发育、增殖分化和细胞凋亡等各种生命活动过程中发挥重要的调节作用。miRNA受到发育学、生物学、衰老与代谢、疾病病理研究、疾病治疗等各个领域研究人员的广泛关注。miRNA由一些DNA转录成RNA并经加工而得，其可结合mRNA，进而抑制转录后的基因表达，miRNA的异常水平与多种疾病密切相关。例如miRNA-21、miRNA-92a、miRNA-31和miRNA-141水平上调是导致癌症的重要因素(Biomedical reports 5.4(2016):395-402.Journal of cancer research and clinical oncology 139.2(2013):223-229.BiomedicinePharmacotherapy 108(2018):1162-1169.Cellular Physiology andBiochemistry 38.2(2016):427-448.)。一种疾病的发生往往与多种miRNA的失调有关，miRNA的多重检测对于疾病的诊断和预后具有非常重要的临床意义。miRNA广泛存在于血液中，血液循环的游离microRNA标志物已经被用于肿瘤的液体活检，有助于癌症早期诊断和筛查(Journal of clinical medicine 4.10(2015):1890-1907)。另一方面有的miRNA存在家族成员，家族成员之间仅存在单个或两个核苷酸的差异性，即单核苷酸多态性(SingleNucleotide Polymorphism，SNP)，例如let 7miRNA家族，人源的let 7miRNA家族成员一共有12种(Trends in molecular medicine,2008,14(9):400-409.Endocrine-relatedcancer,2010,17(1):F19-F36.)。针对miRNA家族成员进行准确区分或分型将推动miRNA的基础研究，例如鉴定出导致疾病的某一关键miRNA成员，并且通过分型分析能够帮助诊断某些疾病类型如癌症(Clinica Chimica Acta 413(2012)1092–1097。Bioorg.Med.Chem.46(2021)116363)，具有重要科学研究意义和临床价值。