[发明专利]一种酵母菌的高密度发酵及十六碳烯酸提取方法

权利要求书

1.一种酵母菌的高密度发酵方法，其特征在于，所述发酵采用有机碳源，补加方式如下：

在生长期，当发酵液中酵母菌的细胞干重≤10g/L时，有机碳源的补加速率为1～4g/(L·h)，当发酵液中酿酒酵母的细胞干重＞10g/L时，有机碳源的补加速率为发酵液中酵母细胞干重增长速率的2～3倍；当发酵液中酵母菌的生长达到稳定期后，有机碳源的补加速率为3～5g/(L·h)。

2.如权利要求1所述酵母菌的高密度发酵方法，其特征在于，所述酵母菌为能够产油脂的酵母菌株，包括但不限于酿酒酵母、胶红酵母、解脂亚罗威亚酵母、弯隐球酵母、斯达氏油脂酵母、粘红酵母、产油油脂酵母、出芽丝孢酵母、圆红冬孢酵母、丛生丝孢酵母或白色隐球酵母；

进一步优选的，所述酵母菌采用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

3.如权利要求1所述酵母菌的高密度发酵方法，其特征在于，所述有机碳源为葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、糖蜜、纤维素水解糖中的一种或几种的组合；

具体的，所述有机碳源为葡萄糖；

具体的，所述有机碳源为葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、糖蜜、淀粉水解糖、纤维素水解糖的组合。

4.权利要求1-3任一项所述高密度发酵方法获得的酿酒酵母及培养物。

5.权利要求1-3任一项所述高密度发酵方法、权利要求4所述酿酒酵母及培养物在十六碳烯酸生产领域的应用。

6.如权利要求1-3任一项所述高密度发酵方法、权利要求4所述酿酒酵母及培养物在十六碳烯酸生产领域的应用，其特征在于，所述应用领域包括但不限于食品、酿造、医药、饲料、化妆品生产领域的应用。

7.一种十六碳烯酸的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括采用权利要求1-3任一项所述高密度发酵方法实现油脂蓄积，再从发酵液中回收十六碳烯酸。

8.如权利要求7所述十六碳烯酸的提取方法，其特征在于，所述提取方法包括以下步骤：浓缩上述发酵液得到浓缩液，至浓缩液中酵母菌的细胞干重为100～300g/L；对所述浓缩液中的酵母菌细胞进行破壁处理，向破壁后的菌液中加入有机试剂进行油脂浸提；所述有机试剂选自乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸丁酯、丙酸乙酯、丁酸乙酯中的一种或几种的混合。

9.如权利要求8所述十六碳烯酸的提取方法，其特征在于，所述浓缩通过离心方式实现；

优选的，通过碟式离心机对发酵液进行浓缩；或，通过酵母分离机进行浓缩；

优选的，所述破壁处理采用机械破碎方式，具体的，通过高压细胞破碎仪，当浓缩液中细胞干重为100～300g/L时，高压细胞破碎仪的操作压力为600～1200bar；

或，所述破壁处理采用酶解方式；具体的，所述酶为碱性蛋白酶，当浓缩液中细胞干重为100～300g/L时，酶用量和细胞干重的比值为0.02～0.05，料液pH为9～10，处理温度为50～55℃，处理时长为≥4小时；酶解破碎后还包括高温灭酶步骤，灭酶温度为95～100℃，保温时间10～20分钟。

10.如权利要求8所述十六碳烯酸的提取方法，其特征在于，所述有机试剂的用量为破壁后菌体干重的6～12倍，上述用量的有机试剂可分1～3次进行油脂浸提；

或，上述提取方法中，还包括对有机试剂萃取浸提部分进行分离及浓缩的步骤；所述分离通过静置分离或通过离心分离，分离后保留比重较轻的有机相部分；所述浓缩通过减压蒸馏的方式对有机相部分进行浓缩，以获得含十六碳烯酸的油脂。