[发明专利]一种花生启动子P28及其应用

说明书

本发明公开了一种花生启动子P28及其应用。所述花生启动子P28的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还公开了花生启动子P28的扩增引物P28‑F和P28‑R的核苷酸序列。所述花生启动子P28可以驱动外源基因在植物种子中表达，该启动子将对农作物种子品质改良或以农作物种子作为“生物反应器”异源合成药物蛋白等具有重要的应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种花生启动子P28及其应用。

背景技术

花生是世界重要的油料作物，其种子富含脂肪和蛋白质，是理想的“生物反应器”。启动子可以驱动外源基因在宿主植物中表达，是花生遗传改良重要的分子工具。自1993年获得转基因花生以来，陆续出现了以抗逆、品质改良等为目标的转基因花生的报道。然而，目前可以利用的花生启动子资源较为匮乏，且大多数启动子功能未被鉴定。

前期，转录组测序挖掘出一个片段在花生种子中表达量极高，经比对分析发现该基因编码水通道蛋白Aquaporin，花生Aquaporin基因尚未知。RT-PCR分析发现，该基因在花生种子中特异高效表达。目前，该基因启动子功能未被克隆鉴定。我们推测其启动子（我们称其P28）可驱动外源基因在植物种子中表达。花生启动子P28的研究，对于农作物种子品质改良以及农作物种子作为“生物反应器”的研究具有重要的应用价值。

发明内容

本发明提供一种花生启动子P28及其应用。所述启动子P28是本发明从花生DNA中克隆并经鉴定得到的，其可驱动外源基因在种子中表达的启动子。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种花生启动子P28，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

进一步的，扩增所述花生启动子P28的引物的核苷酸序列为：

P28-F：5’- GGGGATGTGGACCTATGCTTTGT-3’；

P28-R：5’- AATCAGGGTGTGTTGCCTCATCA-3’。

进一步的，扩增所述花生启动子P28的反应体系为：ddH₂O 31 μL，含Mg²⁺的5x HFbuffer 10 μL；浓度为2.5 mM的dNTP 2 μL；浓度为5 μM的P28-F和P28-R各2 μL；DMSO 0.6μL；Phusion酶0.5 μL；基因组模板2 μL。

进一步的，扩增所述花生启动子P28的PCR扩增的反应条件为：98 ℃预变性 30 s；98 ℃变性10 s，58 ℃退火 10 s，72 ℃ 50 s，30个循环；72 ℃后延伸10 min。

本发明还提供了含有所述的花生启动子P28的植物表达载体。

本发明还提供了所述的含有花生启动子P28的植物表达载体的构建方法，其步骤为：以花生基因组DNA为模板，进行PCR扩增，得到的片段与pEASY-Blunt simple载体连接，筛选阳性克隆，并测序正确后，得到pEASY-P28D质粒；再以pEASY-P28D质粒稀释物为模板，以引物P28-FI和P28-RI进行PCR扩增，得到的片段经无缝克隆技术连接到经HindIII和BamHI 酶切的植物表达载体pBI121质粒，筛选阳性克隆，并测序正确后，得到植物表达载体pBI121-P28。

进一步的，所述引物P28-FI和P28-RI的核苷酸序列为：

P28-FI：5’- ACCATGATTACGCCaagcttAAAGAGGCTGTTAGGGAGTTCAC-3’；

P28-RI：5’- GACTGACCACCCGGggatccGCTACTAATTAAGATTCTTCCTTC-3’。