[发明专利]一种基因甲基化检测引物组合物及其试剂盒和应用

说明书

本发明提供了一种基因甲基化检测引物组合物及其试剂盒和应用，属于分子生物检测技术领域。本发明采用焦磷酸测序技术，可对人源的PAX8、RASSF1及SFRP2基因特定位点进行甲基化检测。应用本发明通过检测人粪便中脱落细胞多基因甲基化程度，可用于鉴别早期结直肠癌和健康人群，其检测灵敏度及准确性高，对于结直肠癌的早期发现和早期治疗具有重要的临床意义，为高危人群的无创筛查提供了新方法。

技术领域

本发明涉及分子生物检测技术领域，具体涉及一种基因甲基化检测引物组合物及其试剂盒和应用。

背景技术

肿瘤(Tumor)是生命有机体的某一部分组织的细胞发生变异增生而形成的，在各种致癌因子的作用下，细胞的生长失去了正常控制，形成了肿瘤。大肠癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一，包括结肠癌和直肠癌。虽然采取多学科综合诊治 (MDT)模式，但大肠癌的发病率与死亡率仍然维持上升趋势，并呈现出年轻化的趋势。大肠癌起病隐匿，病程较长，预后与早期诊断密切相关,多数早期大癌患者可以得到治愈，5年生存率在90％以上，晚期患者则不足10％，但现实中多数患者发现时已属于中晚期。目前的研究发现多数大肠癌是由良性腺瘤性息肉转变化而来，这一演化发展大概需要5-15年，这就为早期诊断提供了时间窗。因此开展无症状人群的早筛以发现癌前病变及早期大肠癌并进行根治性切除是降低大肠癌远期发病率和死亡率的关键(Dinh T,Ladabaum U,Alperin P,et al.Healthbenefits and costeffectiveness of a hybrid screening strategy for colorectalcancer[J].Clinical gastroenterology and hepatology:the official clinicalpractice journal of the American Gastroenterological Association,2013,11(9):1158-1166； Dinh T,Ladabaum U,Alperin P,et al.Health benefits andcosteffectiveness of a hybrid screening strategy for colorectal cancer[J].Clinical gastroenterology and hepatology:the official clinical practicejournal of the American Gastroenterological Association,2013,11(9):1158-1166)。目前用于大肠癌早筛的方法有多种，但各有利弊，仍没有一种适合于大规模的临床早筛方法。如血清肿瘤标志物、粪便隐血试验(FOBT)、结直肠气钡双重造影等非侵入性检查方法，虽然经济、方便，但影响因素较多，从而降低了早筛效能。相较之下，内镜检查在诊断方面具有较高的敏感性和特异性，且能够活检而受到临床医生的推崇(Mandel JS,BondJH, Church TR,et al.Reducing mortality from colorectal cancer by screeningfor fecal occult blood.Minnesota Colon Cancer Control Study[J].The NewEngland journal of medicine,1993,328(19):1365-1371)。但作为一种侵入性检查方法，其检查成本及对患者的依从性较高，在操作者技术水平及经验低下的情况下，有镜检肠道穿孔及息肉切除后出血甚至死亡的风险，这些因素都大大限制了它在大肠癌早筛中的广泛应用。