[发明专利]一种全猪源非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体、该单克隆抗体的表位及其应用

说明书

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种全猪源非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体、该单克隆抗体的表位及其应用。所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3，SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示。该抗体能够特异性的识别并结合P30蛋白的区域为61～100 aa。该抗体保留了轻链、重链可变区的天然配对，具有基因多样性好、全猪源、抗体亲和力好、特异性强等优势，也为探究P30蛋白的功能提供了可靠的研究工具。本发明为开发非洲猪瘟病毒诊断试剂盒提供了新型原材料，也为研制全猪源单克隆抗体的预防与治疗性药物提供了新的技术支持。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种全猪源非洲猪瘟病毒P30蛋白单克隆抗体、该单克隆抗体的表位及其应用。

背景技术

非洲猪瘟病毒(African swine fevervirus,ASFV)是引起猪的高致死性出血性疾病的病原体，具有高死亡率和高发病率的特点。世界卫生组织(OIE)将其列为法定报告的动物疫病。ASFV是唯一已知的虫媒DNA病毒，可以通过乳突钝缘蜱进行传播。非洲猪瘟(ASF)起源于非洲，疣猪和丛林猪是该病毒的宿主。

ASFV是有囊膜的双链DNA病毒，是非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属的唯一成员。ASFV具有20面体对称结构，直径为175～215nm，由内至外依次由病毒基因组、内核心壳、双层内膜、衣壳和囊膜组成。ASFV基因组庞大，大小约为170～190kb，表达160～175个开放阅读框，编码150～200种蛋白。ASFV结构蛋白较多，其中P30蛋白是主要的结构蛋白之一，位于病毒颗粒的内膜。P30由开放阅读框CP204L编码，是一种磷酸化的蛋白，参与病毒内化，在病毒进入宿主细胞的过程中起重要作用；该蛋白具有良好的抗原性，且在病毒感染早期大量出现，能够诱导机体产生中和抗体，是一种理想的血清学诊断和免疫学检测抗原。

发明内容

本发明的目的之一在于利用单个B细胞PCR技术制备一种全猪源非洲猪瘟病毒P30单克隆抗体。

本发明的第二个目的在于提供全猪源非洲猪瘟病毒P30单克隆抗体识别P30蛋白的区域。

本发明的第三个目的在于提供全猪源非洲猪瘟病毒P30单克隆抗体的应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明提供一种全猪源非洲猪瘟病毒P30单克隆抗体，所述单克隆抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示。本申请中包含SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5所示轻链可变区的单克隆抗体分别命名为1B、3C、9C、10C。

本发明还提供一种编码所述全猪源非洲猪瘟病毒P30单克隆抗体的DNA片段。

编码全猪源非洲猪瘟病毒P30单克隆抗体的重链可变区的DNA片段如SEQ ID NO:6所示，编码全猪源非洲猪瘟病毒P30单克隆抗体1B、3C、9C、10C的轻链可变区的DNA片段分别如SEQ ID NO:7、、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10所示。

本发明另外提供一种重组表达载体，所述的重组表达载体包含有上述的DNA片段。

本发明还提供一种宿主细胞，所述的宿主细胞包含有上述的重组表达载体。

上述全猪源非洲猪瘟病毒单克隆抗体P30的制备方法，包括以下步骤：

(1)从自然感染非洲猪瘟免疫耐过猪外周血中分离得到PBMC，利用流式细胞术进行B淋巴细胞分选，把ASFV抗原特异性单个B淋巴细胞分离至96孔板的孔中；