[发明专利]一种卵母细胞体外成熟培养的方法及其应用

说明书

本发明提供了一种卵母细胞体外成熟培养的方法及其应用。本发明的方法包括将非人动物的眼房水用于非人哺乳动物卵母细胞体外成熟。实验证实，经过该成熟方法成熟的卵母细胞，后续体外受精胚胎的发育率和核移植胚胎的发育率均明显高于对照组，显示该方法能有效提高体外卵母细胞成熟的质量。利用眼房水作为卵母细胞体外成熟培养的基础培养液，具有天然的优势，首先眼房水各种营养成分丰富，足以满足卵母细胞体外成熟所需的各种营养需求；其次，眼房水中含有的各种天然的生长因子，对于促进卵母细胞体外成熟与后期体外胚胎发育具有重要作用；再次，直接利用眼房水培养，可免去繁琐的培养液配制过程，有利于体外胚胎培养的大范围推广应用。

技术领域

本发明具体涉及一种卵母细胞体外成熟培养的方法及其应用。

背景技术

卵母细胞体外培养的成熟是动物人工辅助生殖技术中非常重要一个技术环节，随着体外受精、核移植等胚胎工程技术的研究和应用越来越广泛。

在体外卵母细胞成熟培养中，基础培养基、动物血清、激素、生长因子等因素，对卵母细胞体外成熟培养效果具有重要影响。大量的试验证明在动物卵母细胞体外培养中，动物卵母细胞培养成熟液中添加适量生长因子对卵母细胞成熟以及早期胚胎发育有重要作用。所添加的生长因子大多数是动物血清中所含有的物质，如EGF（表皮生长因子）、IGF-I（胰岛素样生长因子-I）、GDNF（神经胶质源营养因子）、LIF（白血病抑制因子）、SCF（干细胞因子）、VEGF（血管内皮生长因子）等，这些生长因子对卵母细胞的体外培养具有一定的促进作用。

卵母细胞体外培育的质量是决定胚胎生物工程研究和应用成败的关键前提因素之一，但至今卵母细胞体外培养的效果仍然不稳定。

发明内容

针对于背景技术中存在的问题与限制，本发明拟解决的技术问题是如何高效地进行卵母细胞体外成熟培养。

本发明所提供的一种卵母细胞体外成熟培养的方法，包括将非人动物的眼房水用于非人哺乳动物卵母细胞体外成熟。

上述方法中，所述非人动物的眼房水作为哺乳动物卵母细胞体外成熟培养时卵母细胞体外成熟液的组成成分。

上述方法中，所述生长因子为促卵泡素、促黄体素、雌激素和丙酮酸钠。

上述方法中，所述卵母细胞体外成熟液的配制方法如下：在眼房水中加入促卵泡素、促黄体素、雌激素和丙酮酸钠，使眼房水成熟液中促卵泡素的浓度为0.01IU/mL、促黄体素的浓度为0.1IU/mL、雌激素的浓度为1mg/mL、丙酮酸钠的浓度为0.2mM，过滤除菌，即得到卵母细胞体外成熟液。

上述方法中，所述非人动物的眼房水来自雌性家畜动物，包括且不限于牛、羊、猪等。

上述方法中，所述非人哺乳动物卵母细胞来自雌性家畜动物，包括且不限于牛、羊、猪等。

本发明还保护上述的卵母细胞体外成熟液。

上述卵母细胞体外成熟培养的方法或上述卵母细胞体外成熟液在动物人工辅助生殖中的应用也属于本发明的保护范围。