[发明专利]LAMP多维度可视化检测显色指示剂及RNA/DNA检测预混液

说明书

本发明公开了LAMP多维度可视化检测显色指示剂，其特征在于：包括酚红、铬黑T和Eva Green。还公开了LAMP多维度可视化RNA/DNA检测预混液。本发明采用酚红作为PH指示剂，采用铬黑T作为金属离子指示剂，采用Eva Green作为荧光指示剂，酚红、铬黑T和Eva Green在一定的浓度范围内相互配合，可以实现检出低拷贝数、降低假阳性率以及可完美解决在面对由于引物设计或模板浓度过低导致的弱阳性在进行拍照存留或目视分辨时出现的难以分辨的问题。本发明的显色指示剂具有分辨度高、灵敏度高、假阳性率低、多维度验证的特点，仅通过肉眼或365nm激发即可对样本阳性、阴性进行判读的效果。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种LAMP多维度可视化检测显色指示剂及RNA/DNA检测预混液。

背景技术

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)，是一种核酸扩增技术。能够通过电泳、DNA嵌入荧光基团、焦磷酸镁的浊度和焦磷酸盐的转化等检测方法。然而这些方法均需要专业检测设备、长时间等待和存在开盖气溶胶污染的缺点。采用PH指示剂或镁离子螯合剂作为指示剂的检测方法在近年快速发展，相较于电泳、DNA嵌入荧光基团、焦磷酸镁的浊度和焦磷酸盐的转化等检测方法具有快速判断、低污染率等优点，在现场诊断中有较大优势，但由于弱阳性与阴性差别极其细微，导致无法对其结果快速的判读，降低了现场诊断的速度和准确性。

现场诊断需要快速、简单、准确的测试，在判读结果时应具有相互验证功能，同时无需复杂昂贵的专业设备。

发明内容

本发明提供了一种LAMP多维度可视化检测显色指示剂。

本发明采用的技术方案为：

一种LAMP多维度可视化检测显色指示剂，其特征在于：包括酚红、铬黑T和EvaGreen，其中酚红的浓度为0.1mM～1mM，铬黑T的浓度为10μM～1mM，Eva Green的浓度为0.1×～1×。0.1×～1×是指使用20X Eva Green原液进行稀释，稀释至0.1×～1×。本发明采用酚红作为PH指示剂，采用铬黑T作为金属离子指示剂，采用Eva Green作为荧光指示剂，酚红、铬黑T和Eva Green在一定的浓度范围内相互配合，可以实现检出低拷贝数、降低假阳性率以及可完美解决在面对由于引物设计或模板浓度过低导致的弱阳性在进行拍照存留或目视分辨时出现的难以分辨的问题，同时解决了由荧光指示剂带来的荧光本底过高需要借助中、大型仪器进行判读的问题。

优选的，酚红的浓度为0.2mM～0.5mM,铬黑T的浓度为50μM～500μM，Eva Green的浓度为0.3×～0.7×。

优选的，酚红的浓度为0.35mM,铬黑T的浓度为200μM，Eva Green的浓度为0.3×。

本发明还公开了一种LAMP多维度可视化RNA检测预混液，包括Tris-HCl、甜菜碱、dNTP、硫酸镁、氯化钠、硫酸铵、氢氧化钾、吐温-20、逆转录酶、Bst DNA聚合酶、FIP引物、BIP引物、F3引物、B3引物、LF引物、LB引物，还包括上述的LAMP多维度可视化检测显色指示剂。

优选的，所述Tris-HCl的浓度为1mM～30mM；

所述甜菜碱的浓度为0.25M～1M；

所述dNTP的浓度为1mM～1.8mM；

所述硫酸镁溶液的浓度为3.75mM～7.5mM；

所述氯化钠溶液的浓度为10mM～100mM；

所述硫酸铵溶液的浓度为5mM～15mM；

所述氢氧化钾的浓度为1mM～10mM；

所述吐温-20的浓度为0.01％～1％；