[发明专利]先天性肌无力小鼠模型、其构建方法及应用

权利要求书

1.一种先天性肌无力小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括：

S1、以Lpin1基因为目的基因构建同源重组载体，针对Lpin1基因的第16和18外显子设计gRNA1和gRNA2，所述gRNA1和gRNA2分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

S2、体外转录合成所述gRNA1、gRNA2和Cas9 mRNA；

S3、将所述gRNA1、gRNA2、Cas9 mRNA和同源重组载体显微注射至健康的C57BL/6J小鼠的受精卵中，获得F0代小鼠；

S4、将所述F0代小鼠通过杂交和/或自交的方式获得Lpin1纯合突变的小鼠模型。

2.如权利要求1所述的先天性肌无力小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述同源重组载体包括2.9kb 5’同源臂、2.7kb的PM区域和3.0kb 3’同源臂。

3.如权利要求1所述的先天性肌无力小鼠模型的构建方法，其特征在于，S3中还包括：

利用PCR对所述F0代小鼠进行基因型测序，其中，PCR检测引物序列为SEQ IN NO.3和SEQ IN NO.4。

4.如权利要求1所述的先天性肌无力小鼠模型的构建方法，其特征在于，S4中还包括：

利用PCR对所述F0代小鼠通过杂交和/或自交的方式得到的后代小鼠进行基因型测序，其中，PCR检测引物序列为SEQ IN NO.5至SEQ IN NO.10。

5.如权利要求4所述的先天性肌无力小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述Lpin1纯合突变包括I717L突变位点和R768Q突变位点。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的构建方法得到的小鼠模型或其子代。

7.一种权利要求1至5中任一项所述的构建方法或权利要求6所述的小鼠模型或其子代在Lpin1基因或Lpin1蛋白相关领域或者免疫相关领域的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用包括需要涉及人类细胞的免疫过程的产品开发，制造人类抗体，或者作为药理学、免疫学、微生物学和医学研究的模型系统中的应用或在生产和利用动物疾病模型，用于人源细胞移植、免疫系统重建、病原学研究和/或用于开发新的诊断策略和/或治疗策略中的应用或筛选、验证、评价或研究药物、药效研究，相关疾病药物以及抗肿瘤药物方面的用途。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用包括在制备预防、诊断或者治疗人类肌无力及相关并发症的药物的用途。

10.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述应用包括在筛选预防、诊断或者治疗人类肌无力及相关并发症的药物的用途。