[发明专利]隐形眼镜的护理液中透明质酸钠的含量的检测方法

权利要求书

1.一种隐形眼镜的护理液中透明质酸钠的含量的检测方法，所述检测方法为高效液相色谱法，其特征在于，所述检测方法包括：

a）配制透明质酸酶处理后的参照溶液和待测溶液，得到含有透明质酸钠的酶解产物的所述参照溶液和所述待测溶液；

b）选择高效液相色谱仪的色谱参数，所述色谱参数包括使用的色谱柱为ODS色谱柱，所述色谱参数包括选择pH值为2.0~5.0的磷酸二氢钾溶液与甲醇的混合相作为流动相，在所述流动相中磷酸二氢钾溶液与甲醇的体积比为95:5，所述流动相中磷酸二氢钾溶液的浓度为5mM~100mM，所述色谱参数还包括检测波长为232nm；

c）分别取所述参照溶液和所述待测溶液进样，并按照所述色谱参数运行所述高效液相色谱仪以获得对应于所述参照溶液的第一峰面积以及对应于所述待测溶液的第二峰面积，所述第一峰面积和所述第二峰面积分别选自所述参照溶液和所述待测溶液的色谱图中的最大峰的峰面积；以及

d）基于以下公式得到所述护理液中透明质酸钠的浓度：

，

其中，c_x是指所述待测溶液的浓度，c_R是指所述参照溶液的浓度，A_x是指所述待测溶液的第二峰面积，A_R是指所述参照溶液的第一峰面积。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤b）中，使用的色谱柱为AQ色谱柱。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤a）中，所述参照溶液的配制方法包括：

准备透明质酸钠，加入至纯化水中；

搅拌至所述透明质酸钠完全溶于所述纯化水，得到透明质酸钠溶液；

取第一体积的透明质酸钠溶液，并向第一体积的所述透明质酸钠溶液中加入第二体积的透明质酸酶进行酶解反应，得到预定浓度的所述参照溶液，其中所述第二体积被设定成，使得1mg的透明质酸钠对应有不低于200活性单位的透明质酸酶。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤a）中，所述待测溶液的配制方法包括：

准备所述护理液；

取第一体积的所述护理液，并向第一体积的所述护理液中加入第二体积的透明质酸酶进行酶解反应；以及

得到所述待测溶液。

5.根据权利要求3或4所述的检测方法，其特征在于，所述酶解反应的反应温度为20℃~60℃，反应时间大于3小时。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述透明质酸酶采用经由微生物发酵得到的透明质酸酶。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱参数还包括：所述色谱柱的柱温为30℃；所述流动相的流速为0.9ml/min~1.2ml/min。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在步骤c）中，所述参照溶液和所述待测溶液的进样量为10~20μl。