[发明专利]冻存液及其制备方法与在人正常肝细胞的应用

权利要求书

1.一种冻存液在人正常肝细胞冷冻保存中的应用，其特征在于，所述冻存液的制备方法包括以下步骤：

(1)预备以下质量百分含量的组份：L-谷氨酸0.001％～0.01％、海藻酸钠0.001％～0.1％、三羟甲基氨基甲烷0.01％～0.4％、磷酸二氢钠0.1％～0.4％、磷酸氢二钠0.2％～0.8％、PBS缓冲液2％～5％，余量为水；

(2)往所述水中先加入L-谷氨酸、海藻酸钠溶解，再加入三羟甲基氨基甲烷搅拌混合均匀，获得混合溶液；

(3)在混合溶液冷却至室温后，用磷酸二氢钠和磷酸氢二钠调节pH至6.2～8.2，并加入PBS缓冲液定容至预定体积，制得冻存液。

2.根据权利要求1所述的冻存液在人正常肝细胞冷冻保存中的应用，其特征在于，所述的水为注射用水。

3.根据权利要求1所述的冻存液在人正常肝细胞冷冻保存中的应用，其特征在于，应用步骤如下：

(S1)将人正常肝细胞加入所述的冻存液中，在混合均匀后获得含人正常肝细胞的冷冻保存液；

(S2)将含人正常肝细胞的冷冻保存液装入冻存管，然后放入程序降温盒，在室温平衡3～10min；

(S3)将程序降温盒放入-70～-90℃的环境中进行梯度降温，超过6～8小时后转入液氮长期保存。

4.根据权利要求3所述的冻存液在人正常肝细胞冷冻保存中的应用，其特征在于，所述步骤(S1)采用移液器吹打混合均匀。

5.根据权利要求3所述的冻存液在人正常肝细胞冷冻保存中的应用，其特征在于，所述步骤(S3)中的降温速率为1℃/min。