[发明专利]冻存液及其制备方法与在免疫细胞的应用

权利要求书

1.一种免疫细胞冻存液，其特征在于，其包括以下质量百分含量的组份：海藻酸钠0.25%～1%、十二烷基硫酸钠0.05%～0.2%、甲基纤维素0.01%～0.02%、磷酸二氢钠0.1%～0.4%、磷酸氢二钠0.2%～0.8%、PBS缓冲液2%～5%，余量为水。

2.根据权利要求1所述的免疫细胞冻存液，其特征在于，所述的水为注射用水。

3.一种免疫细胞冻存液的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤：

（1）预备以下质量百分含量的组份：海藻酸钠0.25%～1%、十二烷基硫酸钠0.05%～0.2%、甲基纤维素0.01%～0.02%、磷酸二氢钠0.1%～0.4%、磷酸氢二钠0.2%～0.8%、PBS缓冲液2%～5%，余量为水；

（2）往所述水中加入海藻酸钠，搅拌溶解，获得海藻酸钠溶液；

（3）往所述水中加入十二烷基硫酸钠，搅拌溶解后依次加入所述海藻酸钠溶液和甲基纤维素，搅拌到充分溶解，获得类胶束溶液；

（4）往上述类胶束溶液中加入PBS缓冲液、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，调节冷冻保存液pH至7.0～7.4，混匀，经过滤除菌，制得免疫细胞冻存液。

4.根据权利要求3所述的免疫细胞冻存液的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中过滤除菌采用滤孔径为0.1～0.3μm的滤网。

5.一种权利要求1-2任意一项所述的免疫细胞冻存液或权利要求3-4任意一项中所述的免疫细胞冻存液的制备方法制备得到的免疫细胞冻存液在免疫细胞的冷冻保存应用。

6.根据权利要求5所述的免疫细胞冻存液在免疫细胞的冷冻保存应用，其特征在于，应用步骤如下：

（S1）收集免疫细胞；

（S2）加入权利要求1-2任意一项所述的免疫细胞冻存液或权利要求3-4任意一项中所述的免疫细胞冻存液的制备方法制备得到的免疫细胞冻存液，混合均匀后转移至冻存管；

（S3）将冻存管放入温度为2～6℃环境中平衡5～15 min，然后移至-70～-90℃环境中降温10～24 h；

（S4）将冻存管移至液氮中长期保存。

7.根据权利要求6所述的免疫细胞冻存液在免疫细胞冷冻保存中的应用，其特征在于，所述步骤（S1）中免疫细胞的浓度为1×10⁶～10⁷ cells/mL。

8.根据权利要求6所述的免疫细胞冻存液在免疫细胞冷冻保存中的应用，其特征在于，所述步骤（S1）中免疫细胞采用离心收集方式进行收集。

9.根据权利要求5-8任意一项所述的免疫细胞冻存液在免疫细胞冷冻保存中的应用，其特征在于，所述免疫细胞为人T淋巴细胞系、人T淋巴细胞白血病细胞和人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞。