[发明专利]一种多孔磷酸钙的蛋白质负载量的检测方法

说明书

本发明公开了一种多孔磷酸钙的蛋白质负载量的检测方法，包括：(1)将负载有蛋白质的多孔磷酸钙溶解于盐酸溶液中，获得测试液；(2)向测试液中加入Bradford工作液进行反应，获得反应液；(3)测量反应液的吸光度；(4)确定反应液的吸光度所对应的蛋白质浓度；(5)基于蛋白质浓度，确定多孔磷酸钙的蛋白质负载量。该检测方法能够简便又准确的检测多孔磷酸钙的蛋白质负载量。

技术领域

本发明涉及检测方法领域，特别是涉及一种多孔磷酸钙的蛋白质负载量的检测方法。

背景技术

多孔磷酸钙固化体是通过磷酸钙粉末添加液相及致孔剂制备的具有多孔结构的磷酸钙固化体。由于磷酸钙具有优良的生物活性、生物相容性、生物可降解性、自固化能力以及易塑性，因此广泛地应用于骨修复领域，特别在修复硬组织缺损、骨折治疗以及骨病治疗等骨科临床中显示出良好的效果。多孔磷酸钙具有较多的孔隙，较大的比表面积，十分适合作为载体使用。

将蛋白质负载与多孔磷酸钙后，由于缓释作用，无法利用纯化水浸泡将蛋白质短时间释放，从而难以测定多孔磷酸钙负载的蛋白质的含量。

发明内容

本发明的目的是提供一种多孔磷酸钙的蛋白质负载量的检测方法，能够简便又准确的检测多孔磷酸钙的蛋白质负载量。

为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供.一种多孔磷酸钙的蛋白质负载量的检测方法，包括：(1)将负载有蛋白质的多孔磷酸钙溶解于盐酸溶液中，获得测试液；(2)向测试液中加入Bradford工作液进行反应，获得反应液；(3)测量反应液的吸光度；(4)确定反应液的吸光度所对应的蛋白质浓度；(5)基于蛋白质浓度，确定多孔磷酸钙的蛋白质负载量。

其中，蛋白质为rhBMP-2蛋白质。

其中，步骤(1)中，盐酸溶液的浓度为0.5mol/L-2mol/L。

其中，步骤(1)中，负载有蛋白质的多孔磷酸钙与盐酸溶液的使用量比为1g：10-40mL。

其中，步骤(3)中，吸光度为在500nm-600nm波长光处的吸光度。

其中，向测试液中加入Bradford工作液进行反应，包括：反应温度为20-40℃，反应时间为5-10min。

其中，步骤(4)包括：获得吸光度与蛋白质浓度对应的标准曲线；将反应液的吸光度带入标准曲线，获得反应液的吸光度对应的蛋白质浓度。

其中，获得吸光度与蛋白质浓度对应的标准曲线包括：制备梯度浓度的蛋白质溶液，检测不同浓度蛋白质溶液的吸光度，以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，制得反映蛋白质浓度与吸光度关系的标准曲线。

其中，制备梯度浓度的蛋白质溶液，包括：梯度浓度的蛋白质溶液中蛋白质为标准牛血清蛋白。

其中，步骤(5)包括，蛋白质浓度与测试液体积的乘积除以负载有蛋白质的多孔磷酸钙的质量，即为多孔磷酸钙的蛋白质负载量。

本发明具有以下有益效果，

利用盐酸将负载有蛋白质的多孔磷酸钙溶解，将蛋白质完全释放。本申请通过控制盐酸的浓度以及检测时间等条件，减少常规Bradford法进行蛋白浓度测定时盐酸的影响。本申请发现多孔磷酸钙本身可中和盐酸部分酸性，降低盐酸的影响，从而能够精确的检测蛋白质的含量。

附图说明

图1是根据本申请一实施例的多孔磷酸钙的蛋白质负载量的检测方法的流程示意图。

图2是根据本申请实施例的不同比例下含rhBMP-2磷酸钙的溶解情况图。

具体实施方式

为使本申请的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下参照附图并举实施例对本申请进一步详细说明。