[发明专利]8-羟基-2-脱氧鸟苷的检测方法

权利要求书

1.一种8-羟基-2-脱氧鸟苷的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：

S1，利用UPLC-MS/MS联用建立所述8-羟基-2-脱氧鸟苷的浓度和峰面积的标准曲线；

S2，用提取液对待测样品进行前处理，获得待检测液；

S3，采用所述UPLC-MS/MS联用对所述待检测液进行检测，得到所述8-羟基-2-脱氧鸟苷的离子谱峰；根据所述标准曲线和所述离子谱峰换算得到所述待测样品中的所述8-羟基-2-脱氧鸟苷的含量；

所述提取液包括75～85v/v％甲醇水溶液。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述S2包括：向所述待测样品中加入提取液，混合，离心，取上清液；将所述上清液过固相萃取柱，流出液即为所述待检测液；

优选地，所述待测样品为如下任意一种：肌肉或尿液；

优选地，所述待测样品为固体时，在加入所述提取液前，将所述待测样品进行剪碎、研磨或粉碎匀浆；

优选地，所述研磨包括在液氮条件下研磨。

3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述固相萃取柱包括HLB固相萃取柱。

4.根据权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于，所述提取液包括同位素内标；

优选地，所述同位素内标包括胆酸-D4；

优选地，所述提取液中的所述同位素内标的浓度为200ng/mL；

优选地，所述提取液的添加量为每克所述待测样品中加入2～5mL所述提取液，更优选为3mL。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述UPLC-MS/MS联用所用的色谱柱为C18色谱柱；

优选地，流动相包括A相和B相，所述A相为0.1％甲酸水溶液，所述B相为0.1％甲酸甲醇溶液，同时含有所述A相和所述B相时，所述A相和所述B相的体积比为0:100～95:5；

优选地，所述UPLC-MS/MS联用采用的离子源为电喷雾电离源；

优选地，所述离子源的电压为4500V或-4500V；

优选地，所述离子源的温度为550℃。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述S3中采用梯度洗脱，所述梯度洗脱过程中，流动相自初始流动相开始以A相逐渐减小B相逐渐增加的方式进行梯度变化，至所述B相占比为100％，并以与所述初始流动相相同组成的流动相洗脱结束所述梯度洗脱，所述初始流动相中所A相与所述B相的体积比为95:5；

优选地，所述梯度洗脱的流速为0.2～0.5mL/min，更优选为0.3mL/min。

7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述初始流动相洗脱的时间为0.5min，且初始流动相洗脱结束后在1.5min内，所述流动相中A相和B相的体积比自95:5逐渐变化至0:100，以所述B相洗脱2min后再以所述初始流动相进行洗脱1min。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述UPLC-MS/MS联用所用的色谱柱的柱温为50℃；

优选地，所述色谱柱的柱参数为100×2.1mm，1.8μm。

9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述S1包括：

S11.精密称取所述8-羟基-2-脱氧鸟苷，用甲醇水溶液溶解得8-羟基-2-脱氧鸟苷母液；

S12.将所述8-羟基-2-脱氧鸟苷母液用甲醇水溶液稀释，获得8-羟基-2-脱氧鸟苷标准液；

S13.利用所述UPLC-MS/MS联用检测所述8-羟基-2-脱氧鸟苷标准液，获得所述8-羟基-2-脱氧鸟苷标准液的所述峰面积；

S14.以所述8-羟基-2-脱氧鸟苷标准液与同位素内标的浓度比为X轴，所述8-羟基-2-脱氧鸟苷标准液与所述同位素内标的峰面积比为Y轴，建立所述标准曲线。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述8-羟基-2-脱氧鸟苷标准液的浓度为0.125～500ng/mL；

优选地，所述甲醇水溶液包括50v/v％甲醇水溶液。