[发明专利]改性HDL的定量方法以及用于该定量方法的分析用试剂

说明书

本发明提供一种改性HDL的定量方法，其为试样中所含的改性HDL的定量方法，其中，使所述改性HDL与改性HDL结合蛋白结合，对所述改性HDL结合蛋白与所述改性HDL的结合体进行定量，所述改性HDL结合蛋白包含具有因子V的L链部位的序列的蛋白质或其突变体。

技术领域

本发明涉及能够用于生活习惯病风险及其治愈效果的判定的改性HDL的定量方法以及用于该定量方法的分析用试剂。

背景技术

HDL(High-Density Lipoprotein，高密度脂蛋白)是所谓的胆固醇的一种，比重高、粒径小。已知HDL负责从组织向肝脏的胆固醇的输送。若HDL在血中浓度较高，则使动脉硬化的风险降低，因此有时也通称为“有益胆固醇”。另一方面，比重低的LDL(Low-DensityLipoprotein，低密度脂蛋白)作为“有害胆固醇”而已知。HDL和LDL的浓度被用作健康诊断的指标。

作为HDL的生理活性，不仅抑制LDL的氧化，而且通过NO的增加等减轻由氧化LDL引起的细胞毒性，发挥抗动脉硬化效果。但是，在冠状动脉疾病患者中，血中改性HDL增加，其经由LOX-1作用于血管，促进动脉硬化，在人的动脉硬化灶中，作为HDL的载脂蛋白的ApoAI改性而成的物质大量蓄积。由于这些结果，为了将HDL用作健康诊断的指标，不仅需要测定HDL的浓度，还需要分别对具有本来的生理活性的HDL和由于改性等而活性发生了变化的HDL进行定量。尤其是，认为如果能够对改性HDL进行定量，则能够用于包含上述冠状动脉疾病在内的、与循环系统以及血液相关的疾病及其风险的验证。

专利文献1公开了一种功能障碍HDL的测定方法，其为试样中所含的功能障碍HDL的测定方法，其中，使试样与功能障碍HDL的受体接触，使试样中的功能障碍HDL与受体结合，并对与受体结合的功能障碍HDL进行检测，受体为LOX-1或其变体，受体固定化于载体，使对功能障碍HDL进行识别的抗体进一步与结合于受体的功能障碍HDL结合。该技术试图提供一种能够广泛检测多种分子形态的功能障碍HDL的功能障碍HDL测定技术，并且提供利用了该技术的生活习惯病的检测技术。

另外，本发明的发明人在专利文献2中公开了在与LOX-1结合的LOX-1结合蛋白序列上直接或经由间隔物连结有ApoA1的全部蛋白序列或部分片段蛋白序列的融合蛋白以及使用了该融合蛋白的高密度脂蛋白的测定试剂盒。该技术通过测定由LOX-1和抗ApoA1抗体同时识别的HDL，能够测定接受了各种改性的HDL，以及使用如针对LOX-1的抗体(抗LOX-1抗体)的LOX-1结合部位等那样使与LOX-1特异性结合的蛋白质和ApoA1融合而成的融合蛋白。通过该融合蛋白，能够同时识别接受了各种改性的HDL，用于测定受体结合活性并测定生理活性本身，因此想要得到不含脂质、能够长期保存、能够再现性地进行调整、能够降低各个测定试验间的偏差而提高可靠性的可成为参考的融合蛋白。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本特许第6231307号公报

专利文献2：日本特愿2018-024007

发明内容

发明所要解决的问题

改性HDL在理论上在实验室中可以通过专利文献1中记载的技术进行定量。本发明的发明人的专利文献2的技术与现有技术相比进一步精炼。可以预想到，应用这些方法，容易建立即使不是充分精炼也能够用于改性HDL的定量的方法。

然而，现状是专利文献1的技术也没有达到普及。进一步地，即使使用本发明的发明人的专利文献2的技术，使用实验室以外的条件、不同的检体实施时，有时改性HDL的定量结果也不是恒定的。上述差异除了实验室内的条件以外，还考虑了实施技术的人的试验技术的差异等各种因素。

本发明的发明人考虑到上述的历史经过和在临床的实际应用中即使条件稍差也应该能够进行测定，以将改性HDL的定量技术改良为更具有通用性的定量技术为目标进行了深入研究。