[发明专利]一种利用大豆异黄酮提高奶山羊乳脂的方法及应用

权利要求书

1.一种利用大豆异黄酮提高奶山羊乳脂的方法，其特征在于,包括如下步骤：

制备精料，所述的精料补充的营养成分为：粗蛋白≧19，粗纤维≦12，粗灰分≦10，总磷≧0.5，钙＝0.7-1.0，氯化钠＝0.2-0.8，赖氨酸＝0.15-0.5，水分≦14；

在制备好的50g精料中加入含量为0mg-200mg的大豆异黄酮得到混合料；

制备基础日粮，所述的基础日粮由下述重量份占比原料组成：玉米50％，麸皮20％，小麦10％，油渣3％，豆粕12％，碳酸氢钙4％，盐0.5％，苏打0.5％；

在进行饲喂时先饲喂混合料再饲喂基础日粮；

饲喂后引起甘油三酯合成基因mRNA表达水平升高，从而影响甘油三酯的合成；引起脂滴形成的相关基因ADFP、XDH和TIP47 mRNA表达水平升高；引起与脂肪酸合成、激活和转运相关的mRNA表达上调，通过提高乳腺上皮细胞脂代谢相关基因的表达，提高乳中的乳脂率，改变脂肪酸结构。

2.一种利用大豆异黄酮提高奶山羊乳脂的应用，其特征在于，通过喂养含有大豆异黄酮的饲料用于以下目的：引起甘油三酯合成基因mRNA表达水平升高，从而影响甘油三酯的合成；引起脂滴形成的相关基因ADFP、XDH和TIP47mRNA表达水平升高；引起与脂肪酸合成、激活和转运相关的mRNA表达上调；该饲料组合物包括溶解于或分散于饲料当中的大豆异黄酮，所述的大豆异黄酮的喂养量为每天0mg-200mg。

3.根据权利要求2所述的利用大豆异黄酮提高奶山羊乳脂的应用，其特征在于，所述的饲料包括混合料和基础日粮，所述的混合料包括精料与0mg/d-200mg/d的大豆异黄酮；

所述的精料补充的营养成分为：

粗蛋白≧19，粗纤维≦12，粗灰分≦10，总磷≧0.5，钙＝0.7-1.0，氯化钠＝0.2-0.8，赖氨酸＝0.15-0.5，水分≦14；

所述的基础日粮由下述重量份占比原料组成：

玉米50％，麸皮20％，小麦10％，油渣3％，豆粕12％，碳酸氢钙4％，盐0.5％，苏打0.5％。

4.根据权利要求1所述的提高奶山羊乳脂方法的效果验证方法：

S1.生产用奶山羊的筛选：

品种：奶山羊，

泌乳阶段：产羔后30天，

体重：60±3.24kg；

S2.饲养环境：

在奶山羊种羊场实行集中舍饲管理，羊舍放置舔砖并自由饮水，

饲喂方式：每日7:50-8:30和17：00-18：00饲喂精料+青贮玉米，每次先精后粗，保证大豆异黄酮的摄入；

S3.饲养过程：

试验在奶山羊种羊场选择30只体况相近且健康的泌乳母羊，随机分为3组，

对照组：饲喂基础日粮，

SIF-1:饲喂基础日粮+100mg大豆异黄酮，

SIF-1:饲喂基础日粮+200mg大豆异黄酮，

精料补充料的营养成分为：粗蛋白≧19，粗纤维≦12，粗灰分≦10，总磷≧0.5，钙＝0.7-1.0，氯化钠＝0.2-0.8，赖氨酸＝0.15-0.5，水分≦14，所用的基础日粮：玉米50％，麸皮20％，小麦10％，油渣3％，豆粕12％，碳酸氢钙4％，盐0.5％，苏打0.5％；

S4.验证过程：

试验期为42天，其中14天预饲期，28天正试期，正试期记录每天的产奶量，并在正试期的0d、14d和28d采集奶样和血样，以进行乳成分、激素水平等指标的检测。

5.根据权利要求1所述的利用大豆异黄酮提高奶山羊乳脂的原理分析方法，其特征在于，采用体外培养奶山羊乳腺上皮细胞试验方法，包括如下步骤：

设置试验分组：对照组：培养基+二甲基亚砜；试验组：培养基+75μM大豆异黄酮；

实验方法：将奶山羊乳腺上皮细胞置于37℃、CO₂浓度为5％的培养箱中培养，培养基成分为D-MEM/F12、10％胎牛血清、5μg/mL胰岛素、10μg/mL表皮生长因子、100μ/mL青霉素、100μ/mL链霉素、1μg/mL氢化可的松；每24h换一次液，当细胞密度达到80％以上时添加大豆异黄酮；处理12h后用PBS润洗两遍，采用Trizol法提取总RNA检测浓度和纯度后反转录为cDNA，并以此为模板通过RT-qPCR检测甘油三脂合成、脂滴合成和脂肪酸合成相关基因的表达量，采用2^-ΔΔct法进行相对定量；

处理12h后用PBS弃去培养基，将细胞用PBS清洗3次，加入甘油三酯检测试剂盒中的裂解液室温轻柔摇晃20min后，用细胞刮铲将细胞碎片和裂解液全部转移至离心管中进行超声破碎，根据试剂盒说明书利用酶比色法检测甘油三酯含量，细胞中的总蛋白含量使用BCA蛋白检测试剂盒进行检测，甘油三酯的总含量使用每孔对应的蛋白含量进行标定校准。