[发明专利]一种利用HPLC检测蛋黄中α-香附酮的富集量的方法

权利要求书

1.一种利用HPLC检测蛋黄中α-香附酮的富集量的方法，其特征在于：该利用HPLC检测蛋黄中α-香附酮的富集量的方法包括如下步骤：

S1：溶液制备：利用甲醇对香附酮标准品进行溶解稀释，制得α-香附酮标品溶液；

S2：水煮处理：利用蒸馏水对鸡蛋进行水煮，水煮过程中添加提前泡好的香附；

S3：皂化：将煮好的鸡蛋的蛋黄与蛋清分离，准确称取蛋黄，对其进行皂化；

S4：提取：在皂化后的样品内添加石油醚，制取石油醚提取液；

S5：浓缩：在石油醚提取液中添加甲醇进行溶解，制得浓缩液，提取溶液进行过滤冷藏，待进行高效液相色谱分析；

S6：检测试验：取α-香附酮标准品溶液和浓缩液进行专属性、线性关系、精密度以及重复性试验。

2.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测蛋黄中α-香附酮的富集量的方法，其特征在于：所述步骤S1中的溶液制取包括如下步骤：向香附酮标品中加入少量甲醇溶剂，溶解后，用移液枪吸取置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解至刻度，即得α-香附酮标准品贮备溶液；精密量取对照品贮备溶液5mL，置50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得α-香附酮标准品溶液。

3.根据权利要求2所述的一种利用HPLC检测蛋黄中α-香附酮的富集量的方法，其特征在于：所述步骤S2中的鸡蛋水煮过程包括如下步骤：取一颗鸡蛋，3g炮制过的香附粉末，将鸡蛋放入烧杯中，加适量的蒸馏水，加入一定浓度的氯化钠溶液搅拌，水沸腾之后再煮10分钟，鸡蛋煮熟取出来后，过冷水之后，去掉蛋壳，拿牙签或者针，在鸡蛋表面均匀的扎一些小孔，将提前泡好的3g香附放入烧杯中加270mL的水，放入鸡蛋，煮至90mL即可。

4.根据权利要求3所述的一种利用HPLC检测蛋黄中α-香附酮的富集量的方法，其特征在于：所述步骤S3中的皂化过程包括如下步骤：将煮好的鸡蛋的蛋黄与蛋清分离，准确称取蛋黄5.0g，置于150mL、4×4宽口的棕色皂化瓶中，向皂化瓶中依次加入10％抗坏血酸溶液3mL，50％的氢氧化钾溶液5mL和30％的无水乙醇30mL，摇晃均匀后，放入70℃水浴恒温振荡器内，固定，皂化30min，打开振荡开关，为了防止鸡蛋附着在瓶壁上，要不停震荡，皂化完成后，取出皂化瓶后自然冷却或者用冷水冲洗，使瓶冷却至40℃。

5.根据权利要求4所述的一种利用HPLC检测蛋黄中α-香附酮的富集量的方法，其特征在于：所述步骤S4中的提取过程包括如下步骤：冷却后的样品溶液移到250mL的分液漏斗中，分3次加入60mL蒸馏水洗涤皂化瓶，并将所有液体转移到分液漏斗之后，振荡混匀，再加入50mL石油醚，轻摇分液漏斗，防止乳化，静置5分钟，待分层后，转移水相到第2个分液漏斗，再加入50mL石油醚，待分层后把水相转移到第3个分液漏斗，最后一次加入50mL石油醚静置之后弃去水相，把3次石油醚相混合，用水不停地冲洗石油醚相，用pH试纸检测水层，直到水层pH值不大于7，弃去水层，最后取适量的无水硫酸钠放于大烧杯中，接着加入石油醚提取液，用玻璃棒搅拌后，再用滤纸过滤到一个干燥的烧杯中，用锡纸密封。

6.根据权利要求5所述的一种利用HPLC检测蛋黄中α-香附酮的富集量的方法，其特征在于：所述步骤S5中的浓缩过程包括如下步骤：把装有石油醚提取液的烧杯，放在50℃～60℃水浴上蒸发，等瓶内没有液体的时候，取下烧杯，向烧杯中加入2.0mL甲醇溶解，用取下针头的注射器吸取溶液，通过0.45μm滤膜过滤到1.5mL的棕色液相瓶里，盖上盖子，放入冰箱冷藏，待高效液相色谱分析。

7.根据权利要求6所述的一种利用HPLC检测蛋黄中α-香附酮的富集量的方法，其特征在于：所述检测试验包括专属性试验、线性关系试验、精密度试验以及重复性试验，所述专属性试验包括如下步骤：取α-香附酮标品溶液一份，3种不同浓度的样品溶液各一份和一个阴性对照品溶液一份，按照试验进行的色谱条件进样测定，做试验专属性检测。