[发明专利]一种利用胞苷酶法合成胞磷胆碱钠的方法

权利要求书

1.一种利用胞苷酶法合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、取胞苷溶于水中，加入ATP、多聚磷酸盐、UCK酶液与PPK酶液，于预定温度、PH值条件下反应一段时间，得到反应液A；

b、在所述反应液A中继续加入氯化胆碱、CMK酶液、NDK酶液、CCT酶液和CKI酶液，在预定温度、PH值条件下继续反应一段时间，得到反应液B，HPLC监控反应进程；

c、当所述反应液B的转化率到达预定数值时，所述反应液B加热搅拌后过滤，滤液进行纳滤，得到纳滤浓液；

d、所述纳滤浓液过柱树脂，水洗去杂质，HCl洗脱，洗脱液浓缩，得到浓缩液；

e、所述浓缩液调pH到预定值，加入溶媒，搅拌降温结晶，固液分离后固体即胞磷胆碱钠粗品；

f、所述胞磷胆碱钠粗品进一步精制得到胞磷胆碱钠成品。

2.根据权利要求1所述的一种利用胞苷酶法合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于，所述a步骤中预定温度为35～37℃、PH6.0～PH8.0，ATP、多聚磷酸盐的加入量分别为底物胞苷摩尔当量的0.01～0.03eq、1～2eq；UCK酶液和PPK酶液加入量分别为胞苷重量的10～30％、10～30％；反应时间为8～12h。

3.根据权利要求1所述的一种利用胞苷酶法合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于，所述a步骤中多聚磷酸盐为三聚磷酸钠、四聚磷酸钠、六偏磷酸钠中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种利用胞苷酶法合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于，所述b步骤中预定温度为35～37℃、PH6.0～PH8.0，氯化胆碱的加入量为底物胞苷摩尔当量的1～1.3eq，CMK酶液、NDK酶液、CCT酶液和CKI酶液的加入量分别为胞苷重量的10～30％、10～30％、10～30％和10～30％；反应时间为12～16h。

5.根据权利要求1所述的一种利用胞苷酶法合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于，所述c步骤中当转化率99％时,加热温度为70～90℃，搅拌时间10～30min；纳滤选择200道尔顿的纳滤膜。

6.根据权利要求1所述的一种利用胞苷酶法合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于，所述d步骤中过柱树脂为强碱性阴离子交换树脂；HCl洗脱液浓度为0.05～0.1M；浓缩采用减压蒸馏，浓缩至胞磷胆碱钠浓度为200～400g/L。

7.根据权利要求1所述的一种利用胞苷酶法合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于，所述e步骤中浓缩液调pH值为6.0～8.0，溶媒为95％乙醇，加入量为浓缩液体积的3～5倍；搅拌转速为50～150rpm；温度为0～10℃；分离时间为10～20h。

8.根据权利要求1所述的一种利用胞苷酶法合成胞磷胆碱钠的方法，其特征在于，所述f步骤中进一步精制的步骤为：胞磷胆碱钠粗品加纯水重新溶解后，加入活性炭搅拌过滤，滤液加入3～5倍体积的95％乙醇，搅拌下降温至0～10℃，10～20h后分离固液，固体真空干燥后即为胞磷胆碱钠成品。