[发明专利]抗H1N1流感病毒血凝素蛋白中和性单克隆抗体ZJU11-01及其应用

说明书

本发明提供抗H1N1流感病毒血凝素蛋白的中和性单克隆抗体ZJU11‑01及其应用。一种抗H1N1流感病毒血凝素蛋白中和性单克隆抗体ZJU11‑01，该单克隆抗体亚型为IgG1、κ型，能与H1N1流感病毒血凝素蛋白抗原特异结合。抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.2，轻链氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。对该单克隆抗体进行进一步的理化性状分析和功能鉴定，该单克隆抗体能够有效中和、治疗H1N1季节性流感病毒感染。本发明为H1N1季节性流感病毒感染的治疗提供了有效的工具，并可推广应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及抗H1N1流感病毒血凝素蛋白中和性单克隆抗体的制备及应用，是利用细胞工程、抗体工程技术，获得分泌抗血凝素蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，通过同品系的小鼠诱导腹水，制备抗血凝素蛋白的单克隆抗体ZJU11-01，鉴定为IgG1、κ型，再通过亲和纯化等技术实现对该抗体的应用。

背景技术

甲型流感病毒表面的血凝素蛋白主要分为18个亚型，它们进一步分为两个系统发育组：组1(H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16、H17和H18亚型)和组2(H3、 H4、H7、H10、H14和H15亚型)。目前，只有H1和H3甲型流感病毒以及乙型流感病毒在人类中传播并包含在季节性流感疫苗中。尽管流感疫苗已问世七十多年，但季节性流感病毒流行仍然是全球共同关注的公共卫生问题。当季节性疫苗与当年的流行毒株不匹配时则可能导致疫苗无效和大流行的发生。12018年初，我国冬季流感主要流行型别由乙型流感悄然转变为甲型H1N1，且来势迅猛；至今，H1N1仍在世界范围内引起死亡病例的增加。其早期症状与普通流感相似，易被轻视，但病情可迅速进展，突然高热、肺炎，重者可以出现呼吸衰竭、多器官损伤，甚至死亡，病死率可达6％。

目前临床治疗流感的抗病毒药物主要为奥司他韦和金刚烷胺，但是已有研究显示甲型 H1N1流感病毒对金刚烷胺的耐药率已超过90％。另外在临床研究中发现流感病毒在药物暴露期间会出现耐药突变，导致对奥司他韦出现耐药。由于耐药率增加、治疗时间窗(必须在症状出现后48小时内用药)受限，寻求新型针对流感感染的治疗药物迫在眉睫。单克隆抗体因其具有高度的特异性和良好的安全性而得到广泛的应用，除了用于治疗癌症和自身免疫疾病外，一些单克隆抗体药物已被批准用于预防和治疗各种传染病的临床试验，例如帕利珠单克隆抗体预防呼吸道合胞病毒感染。

基于以上背景，本项目选定血凝素蛋白为靶抗原，采用融合杂交瘤技术建立稳定分泌抗血凝素蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，并大量制备、纯化和鉴定这些单克隆抗体。该中和性单克隆抗体的成功获得，为治疗H1N1流感病毒感染提供新思路。

本发明用到杂交瘤细胞技术。该技术将免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以建立分泌均质抗体的杂交瘤细胞系，也称为单克隆抗体技术。该技术涉及到动物免疫、细胞培养、细胞融合、细胞克隆培养和免疫测定等一系列方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗H1N1流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体，能识别H1N1季节性流感病毒。该单克隆抗体亚型为IgG1、κ型，命名为ZJU11-01，能特异性识别流感病毒的血凝素蛋白。

SEQ ID No.1

Heavy chain:DNA sequence(372bp)

Signal sequence-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4

GAGGTTCAGCTGCAGCAGTCTGGGGCAGAGCTTGTGAAGCCAGGGGCCTCAGTCAAG

TTGTCCTGCACACCTTCTGGCTTCAACATTAAAGACACCTATATGCACTGGGTGAAGCA

GAGGCCTGAACAGGGCCTGGAGTGGATTGGAAGGATTGCTCCTGCGAATGGTAATACT