[发明专利]一种从蚕蜕或蛹蜕样品中快速提取基因组DNA的试剂盒及方法

说明书

本发明涉及分子生物学领域，公开了一种从蚕蜕或蛹蜕样品中快速提取基因组DNA的试剂盒及方法。采用配制的试剂盒，可以从蚕蜕或蛹蜕中抽提出较高质量的基因组DNA，经过琼脂糖凝胶电泳和分光光度计检测证明该方法得到的DNA满足后续实验的质量要求。本方法可对整合有外源基因的个体进行整个生命周期及后代的跟踪观察。利用本方法提取的蚕蜕基因组DNA具有重复性好、省时省力、获得率高、质量好等优点，且不采用有毒试剂。因此，在实际工作中可根据实验目的、条件选取本试剂盒及方法。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体涉及一种从蚕蜕或蛹蜕样品中快速提取基因组DNA的试剂盒及方法。

背景技术

家蚕，作为鳞翅目的模式昆虫和重要的经济昆虫，其繁殖率高，生长周期短，在分子遗传学、功能基因组学等方面取得了重大的研究进展。但在转基因家蚕操作中，对转基因家蚕个体的分子鉴定面临着活体取样的困难。如能利用蚕蜕、蛹蜕等组织材料应用于转基因蚕种外源基因整合的检测，可对整合有外源基因的个体进行整个生命周期及其后代的跟踪观察。目前，在此方面的资料较少。图1-3所示为家蚕蜕皮过程及产生的蚕蜕。

制备家蚕基因组DNA是进行基因结构和功能研究的基础，避免DNA断裂和降解，保证DNA的完整性，是进行分子标记、基因克隆等后续实验的关键。在实际研究中，如转基因蚕中外源基因的检测则要考虑到对家蚕活体的继代饲养，因此，如能充分利用蚕蜕(幼虫眠起时所脱的皮)、蛹蜕(幼虫化蛹时的蜕皮)提取其个体基因组DNA则既能满足后续实验检测，又能保证活体继代保存，可对整合有外源基因的个体进行整个生命周期及后代的跟踪观察。

传统对家蚕组织的基因组DNA提取大都采用CTAB方法，即先将实验材料液氮研磨，然后用去污剂SDS及蛋白酶K除去样品中的蛋白质，再经苯酚、氯仿的多次抽提获得基因组DNA。这些方法对新鲜组织材料提取的DNA纯度很高，能够满足各类实验要求，但用时长，且部分试剂有一定毒性。国内外公司开发的多种商品化的核酸DNA提取试剂盒对于微量样品也存在提取结果不稳定等问题。另外，针对分离纯化技术，目前有公司开发的离心柱法虽然能够提取DNA且保证其纯度，但其提取的DNA的量普遍不高，无法满足从蚕蜕、蛹蜕等DNA含量少的组织中的提取要求。

因此，需要一种快速、简单的针对蚕蜕、蛹蜕DNA提取的方法，以更广泛的应用于昆虫微量样本DNA的提取。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种从蚕蜕或蛹蜕样品中快速提取基因组DNA的试剂盒及方法。

本发明的发明人开发的试剂盒不用苯酚、氯仿抽提方法，采用发明人自主研究的BufferA和BufferB，结合常用的异丙醇或无水乙醇，即可抽提较高质量的蚕蜕或蛹蜕基因组DNA。具体描述如下：

一种从蚕蜕或蛹蜕样品中提取基因组DNA的试剂盒，主要由下述3种缓冲液组成：

1)BufferA，组分为：100mmol/L Tris-HCL，pH 7.5；100mmol/L EDTA；100mmol/LNaCl；0.5％SDS；所述BufferA的pH值为7.5，溶剂为蒸馏水；

2)BufferB，5mol/L KAC与6mol/L LiCl进行1:2.5的体积比进行配置而成；

3)BufferC，为无水乙醇，使用前加入25ml ddH₂O混匀，预冷使用。

发明人发现：

经机械研磨破壁后加入BufferA裂解缓冲液A可增加裂解液中螯合剂的含量，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用。