[发明专利]拟穴青蟹生物标记物CYP2基因及其在制备病理检测试剂中的应用

说明书

本发明公开了拟穴青蟹生物标记物CYP2基因及其在制备病理检测试剂中的应用。本发明从拟穴青蟹中克隆到拟穴青蟹生物标记物CYP2基因(其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示)，该基因在肝胰腺、鳃、肠、血细胞、心脏、肌肉和胃组织中都有表达，其中在心脏中表达量最高，其次是在肝胰腺中，而在肠道中表达量最低，病原菌副溶血弧菌刺激拟穴青蟹后，SpCYP2基因表达量显著上调，在重金属镉胁迫下，SpCYP2基因表达量显著上调。CYP2基因在毒理学应用上可作为独特的生物标志物，在评价水产动物健康状态具有重要的应用价值。

技术领域：

本发明属于病害防治领域，具体涉及拟穴青蟹生物标记物CYP2基因及其在制备病理检测试剂中的应用。

背景技术：

拟穴青蟹俗称青蟹，具有肉质鲜美营、养价值高等特点，深受消费者喜爱。拟穴青蟹主要分布在我国东南沿海以及东南亚一些国家。拟穴青蟹是我国重要的养殖海水蟹类之一，养殖产量超过16.8万吨。我国拟穴青蟹养殖模式主要以池塘养殖为主，养殖模式相对粗放。近年来，由于青蟹细菌性疾病和水环境中重金属胁迫等因素，导致青蟹病害爆发严重，青蟹亩产量不高，严重阻碍了青蟹产业健康发展。因此，急需发展青蟹病害监测技术，及时防控病害爆发与传播，为提高青蟹产量提高有效手段。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种独特的生物标志物，在评价水产动物健康状态具有重要的应用价值的拟穴青蟹生物标记物CYP2基因及其编码蛋白-CYP2蛋白。

所述的CYP2蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

编码上述CYP2蛋白的拟穴青蟹生物标记物CYP2基因。

优选，所述的拟穴青蟹生物标记物CYP2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明的第二个目的是提供上述拟穴青蟹生物标记物CYP2基因作为生物标志物在制备评价水产动物健康状态的病理检测试剂中的应用。

优选，是检测拟穴青蟹生物标记物CYP2基因表达量的试剂在制备评价水产动物健康状态的病理检测试剂中的应用。

优选，所述的检测拟穴青蟹生物标记物CYP2基因表达量的试剂是定量PCR试剂。

进一步优选，所述的定量PCR试剂，其定量引物是：

SpCYP2-F:5’-TGGTGGCAAGCAGACAGTTCG-3’,

SpCYP2-R:5’-GCCTTGTGCTTCTCGGTCTCAT-3’。

本发明的第三个目的是提供一种评价水产动物健康状态的病理检测试剂，含有检测拟穴青蟹生物标记物CYP2基因表达量的试剂。

本发明从拟穴青蟹中克隆到拟穴青蟹生物标记物CYP2基因，该基因在肝胰腺、鳃、肠、血细胞、心脏、肌肉和胃组织中都有表达，其中在心脏中表达量最高，其次是在肝胰腺中，而在肠道中表达量最低，病原菌副溶血弧菌刺激拟穴青蟹后，SpCYP2基因表达量显著上调，在重金属镉胁迫下，SpCYP2基因表达量显著上调。CYP2基因在毒理学应用上可作为独特的生物标志物，在评价水产动物健康状态具有重要的应用价值。

附图说明：

图1是SpCYP2基因的cDNA序列和氨基酸序列；

图2是SpCYP2基因在不同组织中表达情况，不同字母表示不同组织间差异显著；

图3是在副溶血弧菌刺激下SpCYP2基因表达变化情况，星号(*)表示对照组和副溶血弧菌显著性差异；

图4是在重金属镉刺激下SpCYP2基因表达变化情况，不同字母表示不同组之间差异显著。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。