[发明专利]基于丁基罗丹明B荧光猝灭法测定血清过氧化氢酶活度的方法

权利要求书

1.基于丁基罗丹明B荧光猝灭法测定血清过氧化氢酶活度的方法，其特征在于：基于Fenton试剂作用下的丁基罗丹明B荧光猝灭体系完成过氧化氢酶活度测定，在Fe²⁺的作用下，b-RhB遇H₂O₂出现荧光猝灭，基于加酶前后的荧光变化值确定CAT活度。

2.如权利要求1所述的基于丁基罗丹明B荧光猝灭法测定血清过氧化氢酶活度的方法，其特征在于：测定时，取人体血清50 μL置于50 mL容量瓶中，加2.50 mL 浓度为1 U/mL 的H₂O₂底液，30 ℃恒温反应16 min，再依次加入3.50 mL b-RhB、2.50 mL HAc-NaAc缓冲液、0.40 mL Fe²⁺溶液，室温反应20 min后定容，静置1 min，在1 cm吸收池中测定590 nm发射波长处荧光强度F，同步测定酶空白体系F₀，CAT活度E由△F确定，其中，△F = F -F₀。

3.如权利要求2所述的基于丁基罗丹明B荧光猝灭法测定血清过氧化氢酶活度的方法，其特征在于：酶空白体系F₀通过以下步骤测定：

取人体血清50 μL置于50 mL容量瓶中，加0.40 mL Fe²⁺溶液和2.50 mL HAc-NaAc缓冲液，振荡0.5min，使酶失活，再加入2.50 mL 浓度为1 U/mL 的H₂O₂底液，3.50 mL b-RhB，室温反应20 min后定容，静置1 min。

4.如权利要求2所述的基于丁基罗丹明B荧光猝灭法测定血清过氧化氢酶活度的方法，其特征在于：荧光变化△F与CAT活度E(U/mL)在0.0005～0.05 U/mL活度范围内有良好的线性关系：△F=-1.476+1205E，r=0.9974，检测限最低为2.49×10^-5 U/mL。