[发明专利]一种基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型的构建方法、评价模型及其应用

说明书

本申请涉及皮肤炎症治疗用药物、化妆品筛选方法的技术领域，具体公开了一种基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型的构建方法、评价模型及其应用。构建方法包括如下步骤：S1、制备致炎产物，并梯度稀释至不同浓度；培养得到HaCaT细胞；S2、于HaCaT细胞内分别添不同浓度的致炎产物，并进行培养；S3、通过监测细胞生长曲线，确定添加浓度，得到评价模型。本申请的评价模型可用于探究金黄色葡萄球菌在皮肤炎性中的反应机制、筛选抗炎原料和/或组合物和/或药物、筛选具有皮肤屏障修复作用的化妆品原料和/或组合物和/或产品中、化妆品安全性和/或功效评价；本申请的评价模型具有操作简单方便且应用广泛的优点。

技术领域

本申请涉及皮肤炎症治疗用药物、化妆品筛选方法的技术领域，更具体地说，它涉及一种基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型的构建方法、评价模型及其应用。

背景技术

皮肤作为人体第一道保护屏障，通过物理与生物学屏障阻止外界病原体伤害人体。在免疫系统进行特异性免疫反应之前可以通过皮肤的炎性反应减缓病毒对机体的损伤、减轻组织损伤与细胞坏死并保护人体内部。皮肤的重要组成部分是角质形成细胞，角质形成细胞在皮肤炎症中起到非常重要的作用，也是炎症的基础细胞，它组成了皮肤对外界的天然抗菌屏障。

皮肤炎症反应是指皮肤受到外界的物理（如温度、辐射、机械损伤）、化学或生物化学（如洗涤剂、香皂）、微生物等刺激而诱导细胞（如角质形成细胞、免疫细胞）与血管的一种反应现象。皮肤组织受到外界的刺激后，组成表皮层的主要细胞即角质形成细胞释放促炎因子（如IL-1α、TNF-α），同时释放趋化因子（如IL-8），促炎因子进一步与细胞膜上对应的受体结合激活炎症相关信号通路（如NF-κB通路），从而产生更多的炎症因子，加速花生四烯酸类物质分泌，导致炎症的级联放大。另外趋化因子会诱导免疫细胞如单核细胞发生浸透迁移，从而诱导血管反应，产生红斑等症状。

参与皮肤炎症反应的组份主要是：免疫反应相关细胞（如角质形成细胞和免疫细胞如巨噬细胞）、炎症因子（主要是一些小分子肽类物质，起到诱导和介导趋化的作用）炎性介质（小分子化合物，是花生四烯酸代谢产物，分为前列腺素类和白三烯类）、炎症相关的信号通路（典型的通路如NF-κB信号通路，其中靶点基因主要是参与炎症反应的因子和酶）。

针对以上的炎症组分，也研究出一定的抗炎机制：抑制炎性介质的合成与分泌，主要的靶点是抑制炎性介质合成相关的酶或者标炎性介质，如环氧合酶COX；分泌炎性介质受体拮抗剂，合成释放的炎性介质与其对应的受体结合，激活下游的信号通路，进一步诱导炎症效应反应；抑制炎症因子的合成，主要是通过抑制炎症相关信号通路，典型的炎症相关信号通路为NF-κB。

细菌也是引起皮肤氧化损伤和炎症的元凶之一，其中，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，在皮肤的感染疾病中占据重要地位，是皮炎湿疹患者、特异性皮炎患者感染的主要病原菌之一，同时可以在正常皮肤上被检测到，可引起炎症反应以及皮肤氧化应激反应，严重时造成局部化脓感染。

已有科学家研究关于金黄色葡萄球菌和皮肤微生态及常见皮肤各类疾病反应的关系，也有相应的动物实验基础，但动物模型只能在某些层面模拟疾病发生的状态，与人体存在较大差异，因此建立基于人体皮肤细胞的金黄色葡萄球菌侵染疾病模型是很有必要的。但是，现对于金葡菌的实验主要方向是关于金黄色葡萄球菌的侵染致病，而关于金黄色葡萄球菌致炎或免疫反应得相关研究较少。因此建立简单、易实施的一种基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型及其构建方法是十分必要的。

发明内容

为了方便简单的获知金黄色葡萄球菌对人体皮肤的致炎或免疫的表现，本申请提供一种基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型的构建方法、评价模型及其应用；其中该构建方法及评价模型简单、易实施，并且应用广泛。

第一方面，本申请提供一种基于金黄色葡萄球菌的皮肤炎症体外评价模型的构建方法，采用如下的技术方案：