[发明专利]低氧培养的hUCMSC联合NogoA抗体在脊髓损伤治疗中的应用

说明书

本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及低氧培养的hUCMSC联合NogoA抗体在脊髓损伤治疗中的应用。通过低氧诱导培养得到的hUCMSC细胞与NogoA抗体配合，能有效增强对脊髓组织损伤的修复效果，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及低氧培养的hUCMSC联合NogoA抗体在脊髓损伤治疗中的应用。

背景技术

脊髓损伤导致脊髓功能障碍，引起患者大小便失禁、慢性疼痛及心理精神疾患等，严重影响患者的生活质量，极大地增加了家庭及社会经济负担。原发性脊髓损伤常被认为是不可逆性损伤，因此明确继发性脊髓损伤机制及促进神经功能恢复一直以来是研究的难点与重点。

MSC是一种多能干细胞，在胎儿附属物如羊膜、羊水、脐带及脐血中发现有丰富的MSCs，它们可以称为介于成体干细胞和胚胎干细胞之间的类型，具有更低的免疫原性、更高的增殖能力以及来源更方便等独特的优越性。其中脐带来源的MSCs更丰富，一根脐带可制备相当于约5000毫升骨髓来源的间充质干细胞。故而，深入研究脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的作用并探讨其机制具有重要的意义。

此前有研究表明，3％O₂低氧环境能有效促进骨髓间充质干细胞的增殖与分化，但低氧对人脐带间充质干细胞功能的研究还较少，而对于低氧培养后的充质干细胞对脊髓损伤的修复作用则更是鲜少有所记载。

NogoA又名Reticulon4，是一种在人类中由RTN4基因编码的蛋白质，该蛋白质已被鉴定为具有中枢神经系统特异的神经沸肌产物的抑制剂。在神经发育过程中，Nogo主要由神经元表达，并为CNS内皮(尖端)细胞的迁移和发芽提供抑制信号，从而限制血管密度。研究表明，在神经元损伤期间阻断NogoA(从多发性硬化症等疾病)将有助于保护或恢复受损的神经元。对于该蛋白质的研究表明了治疗自我免疫介导的脱髓鞘和脊髓损伤再生的巨大潜力。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种低氧培养的hUCMSC联合NogoA抗体在制备用于治疗脊髓损伤的药物中的应用。

本发明的第二目的在于提供一种药物组合物，其包含hUCMSC细胞以及NogoA抗体；

所述hUCMSC细胞于5％～7％的低氧环境中培养得到。

优选的，如上所述的药物组合物，所述培养基为添加8v/v％FBS～12v/v％的DMEM低糖培养基；优选还包含BDNF 10ng/ml～30ng/ml。

神经营养因子可促进hUCMSC向神经干细胞分化，并且之前的研究也表面BDNF能够抑制损伤区域免疫反应，改善损伤组织周围微环境抑制神经细胞凋亡。

优选的，如上所述的药物组合物，其培养时间为8～10天。

优选的，如上所述的药物组合物，当细胞培养至75％～85％融合时，进行传代，每3～4天传代一次。

优选的，如上所述的药物组合物，所述NogoA抗体包含氨基酸序列依次如SEQ IDNO:1～3所示的重链互补决定区CDR-VH1、CDR-VH2、CDR-VH3，以及氨基酸序列依次如SEQ IDNO:4～6所示的轻链互补决定区CDR-VL1、CDR-VL2、CDR-VL3。

优选的，如上所述的药物组合物，所述NogoA抗体包含SEQ ID NO:7所示的重链可变区HCVR和SEQ ID NO:8所示的轻链可变区LCVR。

优选的，如上所述的药物组合物，其还包含药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体中的一种或多种。

优选的，如上所述的药物组合物，所述hUCMSC细胞在所述药物组合物中的浓度为10⁵～10⁷个/mL。