[发明专利]用于检测血液中可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)的试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测血液中可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)的试剂盒，该试剂通过胶乳免疫散射速率法和胶乳增强免疫透射比浊法的同步应用，可快速、准确地检测血液中可溶性生长刺激表达基因2蛋白的浓度，具有结果准确、特异性高等特点。可用于临床ST2蛋白的检测。

技术领域

本发明涉及生物技术，更具体地说涉及一种用于检测样本中可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)的试剂盒及其使用方法。

背景技术

生长刺激表达基因2蛋白(ST2)是IL-1受体家族成员，主要包括跨膜型(ST2L)和可溶型ST2两种异构体。可溶性ST2是心脏疾病或损伤时所分泌的物质，如果其在血液中浓度较低时，其IL-33会结合，可达到心脏保护效果维持心脏功能。相反，血液中浓度较高时，ST2会竞争性地与IL-33结合，IL-33的心脏防御信号传达体系无法运行，从而诱发心肌细胞的炎症反应、细胞自然死、纤维化、心肌功能下降等，也会加快心力衰竭。ST2检验与目前心力衰竭标志物(BNP,NT-proBNP)不同，可提供预后信息。不受年龄、体质指数、肾功能异常等的影响可用于连续检测，为心衰患者提供独立的预后信息。

目前市场上检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)均采用酶免(ELI)该方法包括在酶标板上偶联抗体，吸附样本中的抗原，再加入二抗进行显色测定样本中ST2浓度，据二抗的偶联物不同可以分为酶联免疫法(ELISA)和化学发光法(CLI)。这种方法存在检测时间长、成本高等问题，临床使用难度大，可及性不高的问题。

发明内容

针对现有技术中检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)中存在的问题，本发明一方面的目的是提供一种检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)的试剂盒。

为实现本发明的目的，本发明采用的技术方案如下：

用于检测血液中可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)的试剂盒包含第一试剂(也称为，试剂R1)，第二试剂(也称为，试剂R2)，校准品，其中第一试剂包含3-50g/L的电解质、1-50g/L的促进剂、0.5-20g/L防腐剂、0.5-40g/L表面活性剂和pH为6-9的1-100mmol/L的缓冲液；第二试剂包含ST2抗体或其抗原结合片段，按w/v计0.05％-5％的带有羧基的聚苯乙烯微球和pH为5.5～9.5的1-200mmol/L的缓冲液，校准品包含已知浓度的抗原。

优选地，上述电解质选自钠离子或钾离子，

优选地，上述促进剂选自聚乙二醇4000-20000，更优选聚乙二醇6000。

优选地，上述防腐剂选自叠氮钠、苯甲酸钠、亚硝酸钠、硫柳汞、ProClin100、ProClin200、ProClin250、ProClin300、ProClin350中的一种或多种。

更优选地，上述防腐剂选自ProClin300。

优选地，上述表面活性剂选自Tween20、Tween40、Span40、Span80、TritonX-100中的一种或多种。

上述表面活性剂选自Tween20。

优选地，上述缓冲液选自PB缓冲液、EMS缓冲液或Tris缓冲液。

优选地，上述第二试剂的制备方法包括以下步骤：

(1)将10mg带有羧基的聚苯乙烯微球加到1mL pH6.5的1-100mmol/L EMS缓冲液中，

(2)加入10～30μL 15～25mg/mL EDC活化20～30min，离心，沉淀重悬于1mL pH6.5的1-100mmol/L EMS缓冲液中，

(3)加入0.2～0.8mg ST2抗体，18-28℃混匀40～80min，离心，去掉上清，向沉淀中加入1mL pH6.5的1-100mmol/L EMS缓冲液，超声1～3min，