[发明专利]一种3D打印负载干细胞外泌体的气管支架的制备方法

权利要求书

1.一种3D打印负载干细胞外泌体的气管支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤（1）、骨髓间充质干细胞外泌体提取及鉴定；

收集骨髓间充质干细胞培养基的上清液，采用超速离心法提取干细胞外泌体，PBS溶解后，使用0.22μm滤膜过滤除菌，于-80℃保存；应用透射电子显微镜，鉴定提取的外泌体，观察干细胞外泌体的形态并采图；

步骤（2）、3D打印PCL气管支架的制备；

将PCL材料加入至3D打印机打印PCL支架；

步骤（3）、光固化水凝胶负载干细胞外泌体；

选择光固化水凝胶作为外泌体的载体，光固化水凝胶为光固化丝素蛋白，即甲基丙烯酰化丝素蛋白SilMA溶液，之后将经步骤（1）提取到的干细胞外泌体加入至SilMA溶液中，避光4℃保存；所述SilMA溶液的制备方法为：

将再生丝素蛋白用溴化锂溶解，加入甲基丙烯酸缩水甘油酯反应，经透析后冷冻干燥后获得SilMA；使用PBS配置0.4%W/V光引发剂苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基亚磷酸锂，将冻干后的SilMA溶解于苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基亚磷酸锂溶液中得到SilMA溶液；

步骤（4）、负载干细胞外泌体复合气管支架的制备；

将步骤（2）打印得到的PCL支架浸泡在负载干细胞外泌体的SilMA溶液Exo-SilMA中，37℃下浸泡30分钟，之后使用蓝光灯交联5分钟，使SilMA溶液Exo-SilMA均匀包裹PCL支架。

2.根据权利要求1所述的一种3D打印负载干细胞外泌体的气管支架的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，所述光固化水凝胶也可以选择光固化海藻酸钠、光固化硫酸软骨素、光固化明胶或光固化透明质酸。