[发明专利]一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆抗体及其用途

权利要求书

1.一种抗新型冠状病毒的全人源单克隆抗体，其特征在于，所述全人源单克隆抗体具有重链可变区和轻链可变区；

所述重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:11、13、15、17或19中任一项所示；或所述重链可变区的氨基酸序列具有SEQ ID NO:11、13、15、17或19中任一项所示氨基酸序列经替换、缺失或增加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列；

所述轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:12、14、16、18或20中任一项所示；或所述轻链可变区的氨基酸序列具有SEQ ID NO:12、14、16、18或20中任一项所示氨基酸序列经替换、缺失或增加一个或几个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的全人源单克隆抗体，其特征在于，具有如下任一组重链可变区和轻链可变区：

（i）重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:11所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:12所示；

（ii）重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:13所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:14所示；

（iii）重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:15所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:16所示；

（iv）重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:17所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:18所示；

（v）重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:19所示；轻链可变区的氨基酸序列如SEQID NO:20所示。

3.根据权利要求1所述的全人源单克隆抗体，其特征在于，所述全人源单克隆抗体特异性结合新型冠状病毒S2蛋白。

4.一种编码如权利要求1-3任一项所述全人源单克隆抗体的核酸分子，其特征在于，具有如SEQ ID NO:1、3、5、7或9中任一项所示的重链可变区的核苷酸序列；和如SEQ ID NO:2、4、6、8或10中任一项所示的轻链可变区的核苷酸序列。

5.根据权利要求4所述的核酸分子，其特征在于，具有如下任一组重链可变区和轻链可变区：

（i）重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；轻链可变区的核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示；

（ii）重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；轻链可变区的核苷酸序列如SEQID NO:4所示；

（iii）重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示；轻链可变区的核苷酸序列如SEQID NO:6所示；

（iv）重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示；轻链可变区的核苷酸序列如SEQID NO:8所示；

（v）重链可变区的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示；轻链可变区的核苷酸序列如SEQ IDNO:10所示。

6.一种表达载体，其特征在于，包括权利要求4或5所述的核酸分子。

7.一种宿主细胞，其特征在于，包括权利要求6所述的表达载体。

8.根据权利要求1-3任一项所述全人源单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤：

S1.抗原蛋白序列的表达与纯化：从大肠杆菌系统中表达出纯化后的可以用于抗新型冠状病毒单克隆抗体药物筛选的S2蛋白；

S2.噬菌体展示，获得特异性抗体序列：对多名康复者的血液样本进行建库，进行4-5轮的噬菌体生物淘选并利用ELISA进行抗体验证，获得特异性的抗体序列，并且进行重组抗体的表达与纯化；

S3.新型冠状病毒的假病毒中和实验：选取步骤S2中与S2蛋白亲和性较高的抗体进行梯度稀释，与新型冠状病毒假病毒共孵育后一起加入HEK293T-ACE2细胞中，6小时后更换新鲜完全培养基继续培养细胞48小时，通过检测细胞荧光素酶的活性判定抗体中和效率。