[发明专利]一种鼠抗NDM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用

说明书

本发明提供鼠抗NDM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用，通过小鼠杂交瘤单克隆抗体筛选及RT‑PCR法克隆Ig可变区基因，获得稳定分泌鼠抗NDM型碳青霉烯酶抗体的杂交瘤细胞株及其可变区序列；通过系统性评价，鼠抗NDM型碳青霉烯酶抗体在各方面均有较佳表现，效价达到了1:1280000以上，适合作为免疫诊断试剂用于制备碳青霉烯酶耐药菌株体外诊断试剂盒。

技术领域

本发明属于抗体制备技术领域，尤其是涉及一种鼠抗NDM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。

背景技术

碳青霉烯类抗生素是控制临床致病菌感染最有效的药物之一，产碳青霉烯酶生物（CPO）和耐碳青霉烯肠杆菌因其广谱耐药性成为了一个全球公共卫生问题，患者的治疗方法非常有限。碳青霉烯酶是指能够明显水解至少亚胺培南或美罗培南的一类β-内酰胺酶，包括Ambler分子结构分类的A、B、D三类酶，其中，B类为金属β-内酰胺酶（IMP型、VIM型、NDM型等），简称金属酶，主要见于铜绿假单孢菌、不动杆菌、肠杆菌科细菌；A、D类为丝氨酸酶，A类酶（KPC型等）主要见于肠杆菌科细菌；D类酶（OXA型）主要见于不动杆菌。

自2008年首次在一位曾在印度旅游的瑞典籍患者体内分离的一株肺炎克雷伯菌中发现以来，NDM便以惊人的速度在世界范围内播散流行。到目前为止，NDM已在欧洲数十个国家、北美洲的美国、加拿大及墨西哥，亚洲的中国、日本、韩国及新加坡等国家出现。在印度、巴基斯坦等国家，NDM更是引起了流行，其检出率达38.5％。

实验室检测碳青霉烯酶的方法众多。主要包括改良Hodge试验、Carba NP试验、改良碳青霉烯灭活试验（modified carbapenem inactivation method，mCIM）、酶抑制剂增强试验、免疫金标试验以及分子生物学方法等。免疫诊断试剂是体外诊断试剂中发展最快的细分领域，利用抗原与抗体之间的特异性结合进行定性或定量检测。碳青霉烯酶快速诊断产品对于耐药菌株的早期分型、指导用药具有突出作用，对碳青霉烯酶快速诊断产品的研发依然迫在眉睫。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种鼠抗NDM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用。

本发明采用的技术方案是：一种鼠抗NDM型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，命名为1GH10，保藏编号为CGMCC No.21963；或者命名为12HE11，保藏编号为CGMCC No.21964。

一种鼠抗NDM型碳青霉烯酶抗体，抗体1GH10，包括轻链可变区和重链可变区，轻链可变区包括如SEQ ID NO:1所示的CDRL1、SEQ ID NO:2所示的CDRL2和SEQ ID NO:3所示的CDRL3，重链可变区包括如SEQ ID NO:4所示的CDRH1、SEQ ID NO:5所示的CDRH2和SEQ IDNO:6所示的CDRH3；

SEQ ID NO:1 RSSQSIVHSDGNTYLD（CDRL1）

SEQ ID NO:2 KVSNRFS（CDRL2）

SEQ ID NO:3 FQISRVPFT（CDRL3）

SEQ ID NO:4 GYAFSNYLIE（CDRH1）

SEQ ID NO:5 VINPGRDDTNYNEKFKG（CDRH2）

SEQ ID NO:6 FPSILRYDSGSFSYFGLDC（CDRH3）

或者，

抗体12HE11，轻链可变区包括如SEQ ID NO:11所示的CDRL1、SEQ ID NO:12所示的CDRL2和SEQ ID NO:13所示的CDRL3，重链可变区包括如SEQ ID NO:14所示的CDRH1、SEQ IDNO:15所示的CDRH2和SEQ ID NO:16所示的CDRH3；

SEQ ID NO:11 SASSSVSYLH（CDRL1）

SEQ ID NO:12 DTSKLSS（CDRL2）