[发明专利]TCF1-IRF4在制备预测CLL疾病预后试剂盒中的应用

权利要求书

1.TCF1-IRF4在制备预测CLL疾病预后试剂盒中的应用，其特征在于：

①当TCF1的表达水平＜0.67且IRF4的表达水平≥1.99时，CLL患者疾病进展快、临床预后差的可能性较大；

②当TCF1的表达水平＜0.67或IRF4的表达水平≥1.99时，CLL患者疾病进展快、临床预后差的可能性相对较大；

③当TCF1的表达水平≥0.67且IRF4的表达水平＜1.99时，CLL患者疾病稳定、临床预后好的可能性较大。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述预测CLL疾病预后试剂盒中，包括用于扩增TCF1 cDNA的引物和用于扩增IRF4 cDNA的引物，其中，

用于扩增TCF1 cDNA的引物如下：

TCF7 (F): 5' - TCCACCACAGGAGGAAAAAGA - 3'；

TCF7 (R): 5' - CGCAGGGCTAGTAAGCAGTT - 3'；

用于扩增IRF4 cDNA的引物如下：

IRF4 (F): 5' - CGAGAAGGCATCGACAAGCC - 3'；

IRF4 (R): 5' - ATGGACATCTGCGGGTCCTC - 3'。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述预测CLL疾病预后试剂盒中，还包括：

用于扩增内参的引物，具体如下:

GAPDH (F): 5' - GAAGGTGAAGGTCGGAGTCAA- 3'；

GAPDH (R): 5' - GACAAGCTTCCCGTTCTCAG - 3'。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述预测CLL疾病预后试剂盒中，还包括：

用于分离外周血单个核细胞的试剂、用于总RNA提取的试剂、用于逆转录PCR的试剂、用于实时定量PCR的试剂中的任意一种或至少两种。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的用于分离骨髓单个核细胞的试剂为淋巴细胞分离液（Ficoll）。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述的用于总RNA提取的试剂为TRIZOL。

7.如权利要求2-6任一项所述的应用，其特征在于，所述预测CLL疾病预后试剂盒可用于非诊断检测TCF1-IRF4表达。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：包括如下步骤：

S1、取待测骨髓样本，分离得到单个核细胞；

S2、在步骤S1得到的单个核细胞中加入总RNA提取的试剂，混匀；

S3、加入氯仿，混匀后进行离心；

S4、吸取上层液体，加入异丙醇后离心去上清；

S5、乙醇洗涤，干燥，得到RNA样品；

S6、将步骤S5得到的RNA样品逆转录成cDNA；

S7、将步骤S5得到的cDNA，利用所述的试剂盒进行目的基因表达量检测。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：

所述的单个核细胞、总RNA提取的试剂、氯仿的配比按5～10×106个细胞：1毫升：0.1～0.3毫升计算；

所述的总RNA提取的试剂为TRIZOL；

步骤S3中，所述的离心的条件为：温度2～8℃、转速10000～15000g、时间15～30分钟；

步骤S4中，所述的异丙醇的用量按上层液体：异丙醇=体积比1～2:1～2计算；离心的条件为：温度2～8℃、转速10000～15000g、时间10～20分钟；

步骤S5中，所述的乙醇洗涤的次数两次，第一次用75%乙醇在-20℃条件下洗涤，第二次用100%乙醇在-20℃条件下洗涤，每次均匀混合30s后，2～8℃，8000～12000g离心5～10分钟；干燥为真空离心机干燥；条件为温度2～8℃、时间5～10分钟；

步骤S6中，所述的逆转录通过用于逆转录PCR的试剂实现；

步骤S7中，所述的目的基因表达量检测通过用于实时定量PCR的试剂实现。