[发明专利]检测禽偏肺炎病毒的试剂及方法

说明书

本发明公开了检测禽偏肺炎病毒的试剂及方法，属于微生物的测定或检验方法其所用的组合物技术领域。本发明提供了检测或辅助检测禽偏肺炎病毒的试剂，所述试剂或试剂盒包括禽偏肺炎病毒引物探针，所述禽偏肺炎病毒引物探针包括引物APV‑F和引物APV‑R、探针APV‑Probe，所述引物APV‑F为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.2的单链DNA；所述引物APV‑R为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.3的单链DNA；所述探针APV‑Probe的核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.4。并对试剂盒的特异性、灵敏性和重复性进行测试，结果表明本发明提供的试剂灵敏性高，特异性强，适用于低拷贝样品的检测。

技术领域

本发明属于微生物的测定或检验方法其所用的组合物技术领域，具体涉及检测禽偏肺炎病毒的试剂及方法。

背景技术

近年来，随着技术的不断进步和发展，微滴式数字PCR(droplet digital PCR，ddPCR)是近几年出现的新一代聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)技术。通过油包水技术将反应液分割为数万个纳米级大小的微滴，每一个微滴都是一个独立的PCR反应体系，当PCR扩增完成后，利用微滴分析仪逐个对每个微滴进行检测，再根据统计学中的泊松分布原理分析阳性微滴的个数与比例，即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度，从而实现对低至单个拷贝核酸分子的绝对定量。与传统实时荧光定量PCR(quantitativereal-time PCR，qPCR)方法相比，它不依赖于标准曲线，因而定量结果更为精确，同时也使体系受反应抑制因子的影响大大降低。

禽偏肺炎病毒(avian metapneumovirus,aMPV)，早期称作禽肺炎病毒(avianpneumovirus,APV)是偏肺炎病毒属的成员，属于副黏病毒科，该病毒主要危害火鸡和不同品种的鸡，包括种鸡、商品肉鸡和鸡蛋，发病日龄一般在4-7周龄，5-6周龄为发病高峰，主要引起上呼吸道的症状，以喷嚏，眼结膜潮红，泪腺肿，头部出现皮下水肿，俗称肿头；产蛋鸡感染主要引起产蛋下降2％-40％，孵化率降低；随着病情的发展，还表现出神经症状；该病引起的发病率在1％-90％之间，引起鸡死亡率在1％-20％，在发病期间继发其它疾病的感染，会引起更大的死亡，造成对养禽业尤其是种禽的极大危害。

发明内容

本发明要解决的技术问题是如何准确测定禽偏肺炎病毒。

为解决上述技术问题，第一个方面，本发明提供检测或辅助检测偏肺炎病毒的方法，所述方法包括利用试剂或试剂盒对待测样品进行数字PCR，根据数字PCR产物确定或辅助确定待测样品是否为偏肺炎病毒或，是否含有偏肺炎病毒或，是否感染偏肺炎病毒，

所述试剂或试剂盒为检测或辅助检测禽偏肺炎病毒的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括禽偏肺炎病毒引物探针，所述禽偏肺炎病毒引物探针包括引物APV-F和引物APV-R、探针APV-Probe，

所述引物APV-F为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.2的单链DNA；

所述引物APV-R为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.3的单链DNA；

所述探针APV-Probe的核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.4。

进一步地，上述的方法中，所述APV-F、APV-R、APV-Probe的物质的量比值为2:2:1。

进一步地，上述的方法中，所述试剂或试剂盒还包括阳性标准品质粒。

进一步地，上述的方法中，所述阳性标准品质粒包括核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的DNA分子。

进一步地，上述的方法中，所述数字PCR中采用的PCR体系中所述APV-F的含量为1μmol/μL，所述APV-R的含量为1μmol/μL，所述APV-Probe的含量为0.5μmol/μL。