[发明专利]检测鸡滑液囊支原体的方法及其所用试剂

说明书

本发明公开了检测鸡滑液囊支原体的方法及其所用试剂，属于核酸或微生物的测定或检验方法技术领域。本发明公开了检测或辅助检测鸡滑液囊支原体的方法，所述方法包括利用试剂或试剂盒对待测样品进行数字PCR，根据数字PCR产物确定待测样品是否为鸡滑液囊支原体或，是否含有鸡滑液囊支原体或，是否感染鸡滑液囊支原体，所述试剂或试剂盒包括鸡滑液囊支原体引物探针，所述鸡滑液囊支原体引物探针由特异扩增含有核苷酸序列是SEQ ID No.1的DNA片段在内的鸡滑液囊支原体基因组DNA片段的引物和与核苷酸序列是SEQ ID No.1的DNA片段特异结合的探针组成。该方法可用于检测环境样品和食品。

技术领域

本发明属于核酸或微生物的测定或检验方法技术领域，具体涉及检测鸡滑液囊支原体的方法及其所用试剂。

背景技术

鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)，通常寄生在呼吸道系统，是一种能感染鸽子、鹌鹑等野禽和鸡、鸭、鹅等家禽，从而引起以关节滑液囊膜及腱鞘等发生传染性渗出性滑膜炎、腱鞘滑膜炎及黏液囊炎为主要特征的传染病，也可以引起呼吸道疾病，严重的甚至引起全身性传染病，在野生条件下家禽支原体引起的关节炎都是由滑液支原体感染引起的，滑液支原体可继发新城疫病毒、大肠杆菌、传染性支气管炎病毒等病原微生物混合感染。6日龄左右的雏鸡就可以感染传染性滑膜炎，鸡群中常见滑膜炎感染率从2％到75％，主要感染腿关节，特别是胫跗跖跗关节，引起鸡的淘汰率高，给国内外的养鸡业造成巨大的经济损失。

近年来，随着技术的不断进步和发展，微滴式数字PCR(droplet digital PCR，ddPCR)是近几年出现的新一代聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)技术。通过油包水技术将反应液分割为数万个纳米级大小的微滴，每一个微滴都是一个独立的PCR反应体系，当PCR扩增完成后，利用微滴分析仪逐个对每个微滴进行检测，再根据统计学中的泊松分布原理分析阳性微滴的个数与比例，即可得出靶分子的起始拷贝数或浓度，从而实现对低至单个拷贝核酸分子的绝对定量。与传统实时荧光定量PCR(quantitativereal-time PCR，qPCR)方法相比，它不依赖于标准曲线，因而定量结果更为精确，同时也使体系受反应抑制因子的影响大大降低。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，如何实现鸡滑液囊支原体的精准检测。

为解决上述技术问题，第一个方面，本发明提供检测或辅助检测鸡滑液囊支原体的方法，所述方法包括利用试剂或试剂盒对待测样品进行数字PCR，根据数字PCR产物确定或辅助确定待测样品是否为鸡滑液囊支原体或，是否含有鸡滑液囊支原体或，是否感染鸡滑液囊支原体，

所述试剂或试剂盒为检测或辅助检测鸡滑液囊支原体的试剂或试剂盒，所述试剂或试剂盒包括鸡滑液囊支原体引物探针，所述鸡滑液囊支原体引物探针包括引物MS-F和引物MS-R、探针MS-Probe，

所述引物MS-F为核苷酸序列是SEQ ID No.2的单链DNA；

所述引物MS-R为核苷酸序列是SEQ ID No.3的单链DNA；

所述探针MS-Probe的核苷酸序列是SEQ ID No.4。

进一步地，上述的方法中，所述MS-F、MS-R、MS-Probe的物质的量比值为2:2:1。

进一步地，上述的方法中，所述数字PCR试剂或试剂盒还包括阳性标准品质粒。

进一步地，上述的方法中，所述阳性标准品质粒包括核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的DNA分子。

进一步地，上述的方法中，所述数字PCR中采用的PCR体系中所述MS-F的含量为1μmol/μL，所述MS-R的含量为1μmol/μL，所述MS-Probe的含量为0.5μmol/μL。