[发明专利]一种生产手性醇的方法

权利要求书

1.一种生产手性醇的方法，所述方法包括采用酮还原酶突变体催化潜手性酮类化合物进行还原反应生产所述手性醇，

其中所述酮还原酶突变体为SEQ ID NO:1或与SEQ ID NO:1具有80％以上同一性的氨基酸序列；

所述手性酮类化合物具有如下式I结构：

其中R’和R”各自独立地为烷基、烷芳基、烷杂芳基、环烷基、芳基或杂芳基，或者R’和R”与羰基上的碳共同形成杂环基、碳环基或杂芳基，所述杂环基和杂芳基中的杂原子各自独立地选自氮、氧和硫中的至少一种，所述烷芳基中的芳基、芳基中的芳基、烷杂芳基中的杂芳基、杂芳基中的杂芳基、碳环基中的碳环基或杂环基中的杂环基各自独立地未被取代或被卤素、烷氧基、硝基或烷基中的至少一个基团所取代；优选的，R’和R”各自独立地为C1～C8烷基、C5～C10环烷基、C5～C10芳基或C5～C10杂芳基，或者R’和R”与羰基上的碳共同形成C5～C10杂环基、C5～C10碳环基或C5～C10杂芳基，所述C5～C10杂环基和C5～C10杂芳基中的杂原子各自独立地选自氮、氧和硫中的至少一种，所述C5～C10芳基中的芳基、C5～C10杂芳基中的杂芳基、C5～C10碳环基中的碳环基或C5～C10杂环基中的杂环基各自独立地未被取代或被卤素、烷氧基、硝基或烷基中的至少一个基团所取代。

2.根据权利要求1所述的方法，所述手性酮类化合物结构如式(I-1)所示：

其中R₁或R₂选自氢、卤素、C1～C8烷基、C5～C10环烷基、C5～C10芳基或C5～C10杂芳基，其中所述烷基、环烷基、芳基或杂芳基各自独立地未被取代或被卤素、烷氧基、硝基或烷基中的至少一个基团所取代；R₃选自氢、卤素、C1～C3烷基。

更优选地，所述酮类化合物为

3.根据权利要求1或2所述的方法，进一步包括在反应体系中加入辅酶、辅酶再生体系和缓冲液；

进一步地，反应体系中酮类化合物的浓度为1g/L～200g/L；

进一步地，反应体系的pH值为5.0～9.0，反应体系的反应温度为4～60℃；

进一步地，辅酶为NADH、NADPH或NAD+；

进一步地，缓冲液为磷酸缓冲液、Tris-HCl缓冲液、巴比妥钠-HCl缓冲液或柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。

4.根据权利要求3所述的方法，所述辅酶再生体系选自但不限于以下几种：一是异丙醇，辅酶NADH或NAD+；二是葡萄糖，辅酶NADH或NAD+，葡萄糖脱氢酶；三是甲酸根化合物，辅酶NADH或NAD+，甲酸脱氢酶。

5.根据权利要求1所述的方法，可使用两种或两种以上酮还原酶突变体的混合物。

6.根据权利要求1所述的方法，所述的酮还原酶的突变体，进一步地，突变的位点还至少包括如下任一位点或两个及以上位点的组合：V14、I42、A97、G170、A242、I262和F286；或者所述酮还原酶突变体的氨基酸序列具有发生突变的氨基酸序列中的突变位点，且与发生突变的氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述突变的位点为以下一个或两个以上的组合：V14E、I42L、A97H、G170R、A242L、I262A和F286S。

8.根据权利要求6所述的方法，所述酮还原酶的突变进一步包括如下任一种位点组合突变：V14E+I42L、V14E+A97H、V14E+G170R、V14E+A242L、V14E+I262A、V14E+F286S、V14E+I42L+A97H、V14E+I42L+G170R、V14E+I42L+A242L、V14E+I42L+I262A、V14E+I42L+F286S、V14E+I42L+A97H+G170R、V14E+I42L+A97H+A242L、V14E+I42L+A97H+I262A、V14E+I42L+A97H+F286S、V14E+I42L+A97H+G170R+A242L、V14E+I42L+A97H+G170R+I262A、V14E+I42L+A97H+G170R+F286S、V14E+I42L+A97H+G170R+A242L+I262A、V14E+I42L+A97H+G170R+A242L+F286S、V14E+I42L+A97H+G170R+A242L+I262A+F286S。