[发明专利]一种同时检测5种类固醇激素的方法、试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种同时检测5种类固醇激素的方法、试剂盒及其应用，属于类固醇激素检测技术领域。所述方法包括：基于LC‑MS/MS对经过前处理后的待测样品进行检测。本发明通过优化前处理方法，从而实现对睾酮、雄烯二酮、17α‑羟孕酮、双氢睾酮、硫酸脱氢表雄酮5种类固醇激素的准确检测，该方法可以应用于临床雄激素血症中重要类固醇激素的检测项目，有助于给出受试者体内上述5种类固醇激素的真实浓度的真实水平，非常有助于临床或实验室使用，对于高雄激素血症、多囊卵巢综合征的辅助诊断具有重要指导意义，具有较高的实际应用价值。

技术领域

本发明属于类固醇激素检测技术领域，具体涉及同时检测5种类固醇激素的方法、试剂盒及其应用。

背景技术

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome，PCOS)是一种常见的生殖内分泌代谢性疾病，起病多见于青春期，临床上多表现为月经不调、不孕、多毛痤疮、肥胖、黑棘皮症等。由于其临床表现呈现高度异质性，不仅严重影响患者的生殖功能，而且雌激素依赖性肿瘤如子宫内膜癌发病率会增加，相关的代谢失调包括高雄激素血症、胰岛素抵抗、糖代谢异常、脂代谢异常、心血管疾病发病率也会增加。现阶段对于PCOS的诊断主要依据2003年欧洲生殖和胚胎学会与美国生殖医学学会的专家会议推荐的标准：①稀发排卵或无排卵；②高雄激素的临床表现和/或高雄激素血症；③卵巢多囊性改变：一侧或双侧卵巢直径2～9mm的卵泡≥12个，和/或卵巢体积≥10mL；④上述3条中符合2条，并排除其他高雄激素病因：先天性肾上腺皮质增生、柯兴氏综合征、分泌雄激素的肿瘤等，以及其他引起排卵障碍的疾病，如高泌乳素血症、卵巢早衰和垂体或下丘脑性闭经，以及甲状腺功能异常，可确诊为PCOS。

高雄性激素血症被普遍认为是PCOS关键的病理生理改变，对雄性激素的检测是临床诊断PCOS的重要依据。在女性体内存在多种雄性激素，其中，睾酮(T)的血清水平高于其他雄性激素，是PCOS中主要的病源性雄性激素。目前，临床大多依靠检测睾酮水平判断患者是否存在高雄性激素血症。此外，硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)、雄烯二酮(A4)、17α-羟孕酮(17-OHP)、双氢睾酮(DHT)也是人体内重要的雄性激素，一些研究表明，这些激素的血清水平在PCOS患者与正常人群中存在差别，可为PCOS的诊断提供参考。50％的PCOS病人会出现血清DHEAS水平升高，其中5％的患者有且只有DHEAS这一雄性激素特异性升高，同时检测T和DHEAS可以提高PCOS的诊断率。A4是T的直接前体，雄性激素检测中如果加入A4，大约可以提高9％的PCOS检出率；DHT是T经过5α-还原酶作用转化而来，其雄性激素活力最强，检测DHT能够帮助解释局部目标组织中雄性激素活性过高的现象；17-OHP是类固醇合成通路中的中间物质，同时也是盐皮质激素和雄性激素的前体，其血清水平在非典型肾上腺皮质增生(Non-classic CAH)病人中异常升高，因此17-OHP被许多相关专业学会推荐用于PCOS病患诊断，以排除Non-classic CAH。

鉴于上述5种类固醇激素在人体内的重要地位，对其准确定量有助于辅助诊断相关疾病。临床实验室多采用自动化免疫法检测激素，但其特异性差，易受温度、pH、离子强度、试剂免疫活性、易噬性抗体等因素干扰而造成假阳性或假阴性结果；液相色谱-串联质谱技术(LC-MS/MS)因其所需样本量少、可同时检测多种物质，且精密度和准确度高，是激素“金标准”。因此，采用LC-MS/MS实现对T、A4、DHEAS、17-OHP、DHT的准确检测具有重要意义。

目前能够同时检测睾酮、雄烯二酮、17α-羟孕酮、双氢睾酮、硫酸脱氢表雄酮5种类固醇激素的LC-MS/MS方法少有报道，且其前处理方法采用蛋白沉淀结合固相萃取法，然而，固相萃取操作较为复杂，批间重复性难以保证，且价格昂贵。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种同时检测5种类固醇激素的方法、试剂盒及其应用。本发明通过优化前处理方法，从而实现对睾酮、雄烯二酮、17α-羟孕酮、双氢睾酮、硫酸脱氢表雄酮5种类固醇激素的准确检测，具有较高的实际应用价值。