[发明专利]一种基因编辑酵母体外合成麝香酮的方法

权利要求书

1.一种基因编辑酵母体外合成麝香酮的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤（1）支链脂肪酸合成：丙二酰-酰基载体蛋白质与2-酮异戊酸盐在硫胺素代谢调节蛋白的作用下，形成2-甲基丙烯-ACP，并在脂肪酸合酶FAS1/FAS2的作用下，延伸合成14-甲基-十五酰-辅酶A，在TES1的作用下，产生14-甲基-十五烷酸；

步骤（2）ω-羟基化：14-甲基-十五烷酸在CYP54A1、CYP54A13或CPR2的作用下发生ω-羟基化，形成ω-羟基-14-甲基-十五烷酸；

步骤（3）环化成酮：ω-羟基-14-甲基-十五烷酸在内酯脂肪酶催化下形成麝香酮。

2.根据权利要求1所述的基因编辑酵母体外合成麝香酮的方法，其特征在于：所述步骤（1）中，通过过表达THI3、FAS1、FAS2、TES1基因，增加14-甲基-十五烷酸的合成量；同时通过敲除ADHs基因与FAO基因，减弱脂肪酸还原醇化或氧化，从而进一步增加14-甲基-十五烷酸的合成量。

3.根据权利要求2所述的基因编辑酵母体外合成麝香酮的方法，其特征在于：所述ADHs基因包括ADH-A4、ADH-A10、ADH-B2、ADH-B4、ADH-B1。

4.根据权利要求1所述的基因编辑酵母体外合成麝香酮的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，利用CRISPR/Cas9技术形成突变酵母内CYP52A17、CYP53A14以及CPR2基因，构建氧化能力弱的CYP54A17mut、CYP53A14mut和CPR2mut酶基因；14-甲基-十五烷酸在这些突变酶的作用下发生ω-羟基化，形成ω-羟基-14-甲基-十五烷酸。

5.根据权利要求1所述的基因编辑酵母体外合成麝香酮的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，外源性导入内酯脂肪酶基因，使酵母表达内酯脂肪酶，从而具备合成麝香酮的能力。