[发明专利]钝齿棒杆菌表面蛋白ProH及其在表面展示系统中的应用在审
| 申请号： | 202210352090.5 | 申请日： | 2022-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN114805505A | 公开（公告）日： | 2022-07-29 |
| 发明（设计）人： | 黄明珠;宋卓琳;陈雪岚;涂宗财;李金林;张露;彭斌;胡明明 | 申请（专利权）人： | 江西师范大学 |
| 主分类号： | C07K14/34 | 分类号： | C07K14/34;C12N15/31;C12N15/77;C12N1/21;C12R1/15 |
| 代理公司： | 南昌华成联合知识产权代理事务所(普通合伙) 36126 | 代理人： | 张建新 |
| 地址： | 330000 *** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 钝齿棒 杆菌 表面 蛋白 proh 及其 展示 系统 中的 应用 | ||
1.一种钝齿棒杆菌表面蛋白ProH，其特征在于：氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.编码权利要求1所述的钝齿棒杆菌表面蛋白ProH的基因，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.根据权利要求1所述的钝齿棒杆菌表面蛋白ProH作为锚定蛋白在表面展示系统中的应用，其特征在于：所述的表面展示系统为钝齿棒杆菌细胞表面展示系统。
4.一种钝齿棒杆菌细胞表面展示系统，其特征在于：是以权利要求1所述的钝齿棒杆菌表面蛋白ProH为锚定蛋白，将靶蛋白固定在钝齿棒杆菌细胞表面构成的。
5.根据权利要求4所述的钝齿棒杆菌细胞表面展示系统，其特征在于：所述靶蛋白为荧光蛋白。
6.根据权利要求4所述所述的钝齿棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)将编码权利要求1所述的钝齿棒杆菌表面蛋白ProH的基因与靶蛋白基因通过搭桥PCR得到融合片段；
(2)将步骤(1)中得到的融合基因片段插入表达载体构建表达细胞表面展示蛋白的载体；
(3)将步骤(2)构建的载体转化钝齿棒杆菌，然后根据表达载体上的筛选标记筛选阳性转化子，即得到所述钝齿棒杆菌细胞表面展示系统。
7.根据权利要求6所述的钝齿棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，其特征在于具体包括如下步骤：
(i)将编码权利要求1所述的钝齿棒杆菌表面蛋白ProH的基因、靶蛋白的基因和表达载体通过同源重组的方式，构建得到重组质粒；
(ii)将步骤(i)中得到重组质粒转化钝齿棒杆菌，挑取阳性克隆子，得到所述钝齿棒杆菌细胞表面展示系统。
8.根据权利要求7所述的钝齿棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，其特征在于：步骤(i)中所述的编码所述钝齿棒杆菌表面蛋白ProH的基因序列如SEQ ID NO:2所示。
9.根据权利要求7所述的钝齿棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，其特征在于：步骤(i)中所述的靶蛋白为增强绿色荧光蛋白(sfGFP)。
10.根据权利要求7所述的钝齿棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，其特征在于：步骤(i)中所述的表达载体为钝齿棒杆菌表达载体pXMJ19。
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