[发明专利]钝齿棒杆菌表面蛋白ProH及其在表面展示系统中的应用

说明书

本发明公开了钝齿棒杆菌表面蛋白ProH及其在表面展示系统中的应用。钝齿棒杆菌表面蛋白ProH的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，通过过表达载体pXMJ19在钝齿棒杆菌中表达量高，可将其用于构建高展示效率的钝齿棒杆菌表面展示系统。是以绿色荧光蛋白的编码基因与钝齿棒杆菌表面蛋白ProH编码基因pgsA融合后表达在细胞中，绿色荧光蛋白通过膜结合蛋白ProH展示在细胞的表面。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种钝齿棒杆菌表面蛋白ProH，及其作为锚定蛋白在钝齿棒杆菌表面展示系统中的应用。

背景技术

微生物细胞表面展示技术利用分子生物学手段将外源靶蛋白或多肽基因与锚定蛋白基因融合导入宿主中，具体而言，是一种通过特定锚定蛋白将蛋白质或多肽在微生物细胞表面的固定化技术，被展示的靶蛋白可以保持原有的空间构象和生物活性。微生物细胞表面展示在全细胞催化剂、多肽分离、全细胞吸附剂、蛋白文库筛选、疫苗和抗体生产、生物修复、生物传感器等方面都有广阔的应用前景。

目前在微生物表面展示系统中应用比较多的宿主菌主要有噬菌体、酿酒酵母、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌等。钝齿棒杆菌是我国科学家从土壤中分离的一种革兰氏阳性菌，广泛应用于氨基酸、有机酸、醇等化合物的生产，属于食品级微生物，具有较低的细胞外蛋白酶活性等优点，具有非常广阔的在微生物细胞表面展应用前景。目前，钝齿棒杆菌的展示系统的研发极少。为增加钝齿棒杆菌细胞表面展示技术的多功能性，开发新的和有效的锚定蛋白非常必要。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种钝齿棒杆菌表面蛋白ProH。

本发明的另一目的在于提供编码所述钝齿棒杆菌表面蛋白ProH的基因。

本发明的又一目的在于提供一种钝齿棒杆菌细胞表面展示系统。

本发明的再一目的在于提供所述钝齿棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种钝齿棒杆菌表面蛋白ProH，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

所述的钝齿棒杆菌蛋白由56个氨基酸组成，大小约为6.02KDa。

编码所述钝齿棒杆菌表面蛋白ProH的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

所述的钝齿棒杆菌表面蛋白ProH作为锚定蛋白在钝齿棒杆菌表面展示系统中的应用。

所述的表面展示系统为钝齿棒杆菌细胞表面展示系统，所述的钝齿棒杆菌表面蛋白ProH可用于构建钝齿棒杆菌细胞表面展示系统，所述的钝齿棒杆菌细胞表面展示系统是以所述钝齿棒杆菌表面蛋白ProH为锚定蛋白将靶蛋白固定在钝齿棒杆菌细胞表面构成的。

一种钝齿棒杆菌细胞表面展示系统，是以所述的钝齿棒杆菌表面蛋白ProH为锚定蛋白，将靶蛋白固定在钝齿棒杆菌细胞表面构成的。

所述的靶蛋白为荧光蛋白或任意一种蛋白质。

所述的钝齿棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，包括如下步骤：

(1)将编码所述钝齿棒杆菌表面蛋白ProH的基因与靶蛋白基因通过搭桥PCR得到融合片段；

(2)将步骤(1)中得到的融合基因片段插入表达载体构建表达细胞表面展示蛋白的载体；

(3)将步骤(2)构建的载体转化钝齿棒杆菌，然后根据表达载体上的筛选标记筛选阳性转化子，即得到所述钝齿棒杆菌细胞表面展示系统。

所述的钝齿棒杆菌细胞表面展示系统的构建方法，具体包括如下步骤：

(i)将编码所述钝齿棒杆菌表面蛋白ProH的基因、靶蛋白的基因和表达载体通过同源重组的方式，构建得到重组质粒；