[发明专利]一种从海红米糠中提取神经酰胺的方法

说明书

本发明公开了一种从海红米糠中提取神经酰胺的方法，属于分离纯化技术领域。该方法包括：将米糠经鞘磷脂酶和纤维素酶进行双酶法酶解，过滤后用乙醇溶液浸泡，超声热提取，然后经石油醚萃取得到神经酰胺浸膏，神经酰胺浸膏经硅胶柱层析和SPE小柱得到神经酰胺。本发明通过双酶复合酶解的方法，联合超声波热提取与SPE柱层析技术，实现了对海红米糠中神经酰胺的高效提取和纯化。

技术领域

本发明属于酶解技术领域，涉及功效组分的分离纯化，具体涉及一种从海红米糠中提取神经酰胺的方法。

背景技术

我国是以稻谷为主的产粮大国，每年的稻谷产量可达到1.8亿吨以上，而米糠占稻谷的5%~8%，是一种优质的可再生资源，但目前由于米糠的深度开发利用水平较低，绝大部分被作为饲料而处理。海水稻是生长于海边滩涂的一种耐盐碱水稻新品种，其稻米外皮呈紫红色，故也称海红米，素有“药米”之美誉。海红米加工副产物，海红米糠的营养成分丰富，包含如膳食纤维、蛋白质、维生素、多糖、脂肪酸、植酸和矿物质等功能性成分，且多种营养物质含量都远高于白米米糠；除此之外还发现海红米糠比白米米糠含有更丰富的神经酰胺类化合物。

神经酰胺是由长链鞘氨醇通过酰胺键与脂肪酸共价结合而成，其中鞘氨醇和脂肪酸碳链长度、饱和度和羟基数目都可变化。近年来，随着对神经酰胺生物活性的研究与开发，使其成为功能性医药保健品、食品和化妆品等的重要有效活性成分，具有非常大的应用价值。但是，由于神经酰胺分子结构的多样性，而且在生物试样中的含量极低，导致天然神经酰胺的提取比较困难。因此，近几年来各国学者在不断研究从各种动、植物中分离提取此类化合物，其中从天然植物中提取神经酰胺由于安全性高、成本较低，具有广阔的前景。

CN106008253A公开了一种从海红米糠中提取高纯度神经酰胺的方法，包括（1）前处理：将海红米糠原料除杂，粉碎，过筛，然后进行酶解，过滤，得酶解米糠；（2）微波逆流提取：在酶解米糠中加入有机溶剂，进行微波逆流提取，保温过滤，得米糠提取液；（3）浓缩：浓缩米糠提取液并回收有机溶剂，得米糠浓缩液；（4）有机溶剂萃取分离：将米糠浓缩液用有机溶剂搅拌萃取，减压浓缩，得焦油状脂类混合物；（5）硅胶层析吸附分离，有机溶剂洗脱，收集神经酰胺目标馏分；（6）浓缩干燥，得神经酰胺产品。但该专利采用单一酶解的方法，对神经酰胺的提取效率低，提取不够彻底，受环境因素较大，对于海红米糠此类含神经酰胺较高的米糠的实际应用效果并不理想。

从海红米糠中提取神经酰胺是利用海红米糠资源非常有效的一条途径。现有提取方法主要有95%乙醇回流、水回流提取，其中，95%乙醇提取法，生产成本高，可操作性不强；水回流提取粗品中杂质太多，极大的影响后续纯化工序，造成分离纯化困难。另一方面，对于海红米糠此类含神经酰胺较高的米糠的提取，现有方法均不太适用。由此提供一种能从海红米糠中高效提取神经酰胺的方法，以期有效利用海红米糠资源。

发明内容

本发明目的在于解决现有提取方法从海红米糠中提取神经酰胺不充分、收率低等问题，为有效利用海红米糠资源和其类似植物中提取神经酰胺提供参考。

基于上述目的，本发明提供了一种从海红米糠中提取神经酰胺的方法来解决本领域内的这种需要。

一方面，本发明涉及一种从海红米糠中提取神经酰胺的方法，其包括：将米糠经鞘磷脂酶和纤维素酶进行双酶法酶解，过滤后用乙醇溶液浸泡，超声热提取，然后经石油醚萃取得到神经酰胺浸膏，神经酰胺浸膏经硅胶柱层析和SPE小柱分离纯化得到神经酰胺。

进一步地，本发明提供的从海红米糠中提取神经酰胺的方法中，所述酶解包括：将所述鞘磷脂酶和纤维素酶配制成浓度为0.2~0.5w/v%的酶解液；以g:mL计，所述米糠与所述酶解液的配比为1:3~5；以酶活力单位计，所述鞘磷脂酶和纤维素酶的配比为4:6。

进一步地，本发明提供的从海红米糠中提取神经酰胺的方法中，所述酶解液的浓度为0.4w/v%。