[发明专利]一种检测BRAF基因突变的引物探针组合物、试剂盒及其使用方法和应用

权利要求书

1.一种检测BRAF基因突变的引物探针组合物，其特征在于，所述引物探针组合物包括检测BRAF基因突变位点c.1919A＞C的实时荧光PCR引物和检测探针；

所述实时荧光PCR引物包括SEQ ID No.1～2所示的氨基酸序列；

所述检测探针包括SEQ ID No.3所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述检测BRAF基因突变的引物探针组合物，其特征在于，所述探针为Taqman探针，所述Taqman探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；

所述荧光报告基团包括FAM、Cy5、ROX、VIC和NED中的任一种；所述荧光淬灭基团包括MGB、NFQ、QSY、MGB和BHQ1中的任一种。

3.根据权利要求2所述检测BRAF基因突变的引物探针组合物，其特征在于，所述荧光报告基团为VIC；所述荧光淬灭基团为MGB。

4.一种检测BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1～3任一项所述的引物探针组合物。

5.根据权利要求4所述的检测BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括针对人类CFTR基因保守序列特异性的内参引物和内参探针；

所述内参引物包括SEQ ID No.4～5所示的的核苷酸序列；所述内参探针包括SEQ IDNo.6所示的的核苷酸序列。

6.根据权利要求5所述的检测BRAF基因突变的试剂盒，其特征在于，所述内参探针的5’端标记有荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团；

所述内参探针的荧光报告基团与所述检测探针的荧光报告基团不同；

优选地，所述内参探针的荧光报告基团为NED，所述内参探针的荧光淬灭基团为MGB。

7.一种根据权利要求4～6任一项所述的试剂盒以非疾病诊断和/或治疗为目的的使用方法，其特征在于，其包括：

提取待测样本的基因组，使用所述试剂盒对所述待测样本的基因组进行扩增，检测荧光信号，将荧光信号的阈值限设置为0.15，分析Ct值。

8.根据权利要求7所述的使用方法，其特征在于，所述扩增的程序包括：

预变性：95℃、30sec，1个循环；

循环扩增：95℃、10sec，60℃、30sec；

所述循环扩增的次数为45次。

9.一种根据权利要求4～6任一项所述的试剂盒在制备BRAF基因突变相关的癌症诊断试剂中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述癌症包括甲状腺乳头状癌、结直肠癌和黑色素瘤。