[发明专利]一种非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法及应用

权利要求书

1.一种非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法，其特征在于包括以下步骤：

S1、分别将卷柏和卷柏混淆品粉碎，分别加入体积浓度为55～85％v/v的甲醇溶液回流提取，滤过，取滤液，分别制得卷柏提取液和卷柏混淆品提取液；

S2、卷柏提取液的检测分析：通过超高效液相色谱串联高分辨率质谱对卷柏提取液与卷柏混淆品提取液进行数据的采集，获得代谢物检测多峰图，对色谱峰进行峰提取与校正，获取所有代谢物的相对峰面积与保留时间；

S3、代谢组学区分筛选卷柏和混淆品化学表型，筛选卷柏特异性标志物：采用多元统计法进行分析，依次进行主成分分析、层次聚类分析、偏最小二乘判别分析、正交偏最小二乘判别分析，最后根据变量权重值和t检验中P值分析筛选差异标志物，得到鉴别模型区分卷柏与卷柏混淆品；

S4、基于超高效液相色谱-质谱仪测定S3中确定的差异标志物的含量，建立卷柏的质量标准。

2.根据权利要求1所述的非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法，其特征在于，S1中甲醇溶液的体积浓度为65～75％v/v。

3.根据权利要求1所述的非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法，其特征在于，S1中回流提取的时间为30～75min。

4.根据权利要求1所述的非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法，其特征在于，S1中卷柏样品或卷柏混淆品样品与甲醇溶液的质量体积比为0.2～0.4g：30mL。

5.根据权利要求1-4任一项所述的非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法，其特征在于，S2中，所述超高效液相色谱串联高分辨率质谱为超高效液相色谱四级杆飞行时间质谱，色谱柱为C18，1.8μm，2.1mm×100mm；

色谱条件为：流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脱的程序为0～10min，5～15％乙腈；10～20min，15％～35％乙腈；20～30min，35％～55％乙腈；30～40min，55％～85％乙腈；40～45min，85％～95％％乙腈；45～50min，95％～95％％乙腈；流速0.36～0.44mL/min；柱温22～27℃；进样体积为1.8～2.2μL；质谱主要包括：正离子模式检测，电喷雾离子源温度325℃，质谱电压4000V，帘气35psi，一级质谱扫描范围：50～1100m/z；二级质谱在一级扫描基础上选择前3强进行诱导碰撞解离获得二级质谱数据。

6.根据权利要求1-4任一项所述的非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法，其特征在于，S4中所述超高效液相色谱和串联质谱仪为超高效液相色谱三重四级杆质谱，色谱柱为C18，1.8μm，2.1mm×100mm；色谱条件为：流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈，梯度洗脱的程序为0～8min，20～60％乙腈；8～11min，60％～95％乙腈；11～18min，95％～95％乙腈；流速0.36～0.44mL/min；柱温23～27℃；进样体积为1.8～2.2μL；质谱主要包括：正离子MRM扫描方式，其中513.2→297.1为Selaginellin的定量离子，碰撞能量为22V，513.2→419.2为Selaginellin的定性离子，碰撞能量为42V，483.2→389.1为Selaginellin A的定量离子，碰撞能量为28V，483.2→271.1为Selaginellin A的定性离子，碰撞能量为40V。

7.根据权利要求1-4任一项所述的非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法，其特征在于，S3中，以变量重要性1，显著性水平0.05作为门槛值获取差异标志物。

8.根据权利要求1-4任一项所述的非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法，其特征在于，S4中，测定的差异标志物为Selaginellin和Selaginellin A。

9.差异标志物Selaginellin和Selaginellin A作为鉴别卷柏和卷柏混淆品的标志物的应用。