[发明专利]一种非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法及应用

说明书

本发明公开了一种非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法及应用，包括以下步骤：S1、分别将卷柏和卷柏混淆品粉碎，分别加入体积浓度为55～85％v/v的甲醇溶液回流提取，滤过，取滤液，分别制得卷柏提取液和卷柏混淆品提取液；S2、卷柏提取液的检测分析；S3、得到鉴别模型区分卷柏与卷柏混淆品；S4、基于超高效液相色谱‑质谱仪测定S3中确定的差异标志物的含量，建立卷柏的质量标准。本发明阐明了卷柏与卷柏混淆品的差异性，说明代谢组学可以用于区分卷柏与卷柏混淆品，本发明方法先进、实验结果可靠，为地道卷柏品种的鉴定和质量评价提供一种优良的方法。

技术领域

本发明涉及卷柏鉴别方法，特别是一种非靶向代谢组学区分卷柏品种真伪的方法及应用。

背景技术

《中国药典》收录，中药卷柏的正品基源为卷柏科植物卷柏[Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring]或垫状卷柏[Selaginella pulvinata(Hook，etGrev.)Max1m.]的干燥全草(药典引用)。作为传统活血化瘀药材，卷柏是在临床应用广泛，可用于治疗经闭痛经、癥瘕痞块和跌扑损伤。

然而，调研发现目前市售卷柏的品种混乱，鱼龙混杂，良莠不齐，卷柏常见混淆品种有翠云草(Selaginella uncinata)、深绿卷柏(Selaginella doederleinii)、薄叶卷柏(Selaginella delicatula)和江南卷柏(Selaginella moellendorffii)等，这些混淆品也来源于卷柏属，外观形态性状上与正品卷柏类似。尤其混淆品药材切成饮片或粉碎成粉末后，肉眼更难以区分鉴别卷柏真伪。这些混淆品极大扰乱卷柏市场秩序，影响卷柏在临床上合理高效使用。

目前，中药的形态特征和性状观察仍然是卷柏真伪区分的主要方法，实践表明肉眼观察可靠性差，难以区分鉴别卷柏真伪。近十多年来，尽管基因组学等多种分子标记已经在卷柏上得到了一定的应用，但是相关试剂昂贵、步骤繁琐、技术难度大、费时费力，难以快速简洁开展卷柏真伪鉴别，因此亟需高效准确快捷的卷柏的鉴定手段。《中国药典》采用高效液相法，对穗花衫双黄酮进行卷柏质量控制，但是穗花衫双黄酮在混淆品也有分布，不能因此区分卷柏和混淆品，不适合作为质量控制标准。

非靶向代谢组学(Untargeted Metabolomics)是以先进的液质联用或核磁共振分析检测手段，获取分析样品中的代谢物图谱，比较代谢物含量差异，从差异代谢物中可系统筛选一些特异性生物标志物。作为一种系统综合的分析方法，代谢组学在中药品种比较、真伪区分、优劣等级划分和质量控制应用广泛。本研究尝试采用代谢组学区分卷柏和其混淆品种的化学表型，比较卷柏和其混淆品种的化学成分异同，快速准确筛选卷柏和其混淆品种的特异性标志物，从而使药用卷柏品种正本清源。