[发明专利]用于鉴定戊糖片球菌的专用引物与试剂盒

说明书

本发明公开了用于鉴定戊糖片球菌的专用引物与试剂盒。本发明公开的用于鉴定戊糖片球菌的专用引物由名称分别为F3、B3、FIP、BIP、LF和LB的引物组成，F3、B3、FIP、BIP、LF和LB分别为序列表中序列1‑6所示的单链DNA。本发明用于鉴定戊糖片球菌的专用引物可以检测戊糖片球菌，具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速便捷等优点，利用环介导等温扩增方法扩增戊糖片球菌特异性基因片段，填补了啤酒中戊糖片球菌LAMP检测方法的空白，本发明适用于酒厂基层应用和现场快速检测。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中，用于鉴定戊糖片球菌的专用引物与试剂盒。

背景技术

戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)属革兰氏阳性球菌，广泛分布于发酵植物及麦芽汁中，是一种常见啤酒腐败菌。啤酒中存在戊糖片球菌时会产生酸和黄油味的双乙酰，从而引起啤酒腐败。据了解，啤酒生产中从麦芽制备到啤酒酿造的各个阶段，都存在戊糖片球菌污染风险，戊糖片球菌的快速检测成为啤酒厂质量监控亟待解决的一大问题。

常见的戊糖片球菌的检测方法有培养法及分子生物学方法等。培养法经NBB、MRS培养基培养后，根据其菌落形态特征、过氧化氢酶反应及生理生化指标等对菌株进行定性判定，虽然操作简单，但步骤繁琐，耗时较长，难以及时为酒厂提供风险预警。分子生物学方法为近年广受追捧的一种定性检测方法，其依托核酸扩增进行目标物体鉴定，检测效率较高。常用的分子生物学方法主要包括基因芯片技术、聚合酶链式反应及等温扩增技术3种。基因芯片技术是一种融合分子生物学、生命信息学、物理学、计算机学等多种学科交叉形成的综合生物技术，其利用微机械技术，对固体芯片进行微流体单元系统构建，通过将已知序列的特异性寡核苷酸探针接种至芯片表面，实现多种污染菌检测定性。基因芯片技术具有极高的特异性和灵敏度，可实现高通量分析检测，但极容易出现假阳性，技术成本昂贵，无法实现大批量推广。聚合酶链式反应(简称PCR)是分子生物学方法中发展较完善的一种方法，其经反复变温使DNA双链拆分与引物杂交形成新DNA链。以PCR技术进行核酸扩增后既可通过观察凝胶电泳后的目标条带长度判断产物，也可通过探针和荧光试剂的荧光积累变化判定结果，极大减少了操作步骤，为企业节省了人力时间。但PCR技术依赖于精密的温控设备和检测仪器，对实验室环境和人员素质要求高，不利于酒厂基层检测任务开展。

等温扩增方法是近年新兴的一种体外核酸扩增方法。区别于PCR技术，等温扩增对温度变化精密度要求不高，无需特殊仪器设备，极大的解决了基层应用困难的问题，此外，等温扩增特异性强、灵敏度高，0.5h内即可实现目标物体扩增检测，极大提高了检测效率，目前已被广泛应用于病原微生物、转基因物种、动物源性成分分析等领域，并得到国内外学者、企业认可。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何鉴定戊糖片球菌。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了一个引物组，所述引物组由名称分别为F3、B3、FIP、BIP、LF和LB的引物组成；

所述F3为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；

(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；

所述B3为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；

(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；

所述FIP为如下(a5)或(a6)：

(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；