[发明专利]一种新型黄嘌呤氧化酶活性免疫检测试剂盒及应用

说明书

本发明涉及黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测技术领域，公开了一种新型黄嘌呤氧化酶活性免疫检测试剂盒，由试剂1、试剂2和试剂3组成，还公开了试剂盒在检测黄嘌呤氧化酶活性中的应用，其试剂盒通过紫外可见分光光度计进行预热、工作曲线配置以及工作曲线制作和样品测试完成对XOD的免疫检测；本发明的新型黄嘌呤氧化酶试剂盒所含试剂均无毒无害，能较好地保持细胞结构的完整性，对酶的活力没有影响，且试剂盒的检出限范围较广，即[XOD]：5‑50mu/mL(5.2×10^‑4‑5.2×10^‑3mg/mL)且工作曲线的线性关系较好，能达到R²0.98。

技术领域

本发明涉及黄嘌呤氧化酶活性检测技术领域，具体涉及一种新型黄嘌呤氧化酶活性免疫检测试剂盒及应用。

背景技术

黄嘌呤氧化酶(Xanthine Oxidase，XOD)是一种含钼、非血红素铁、无机硫化物、FAD的黄素酶，广泛存在于哺乳动物和灵长类动物的肝肾细胞内，是细胞内嘌呤代谢作用的重要参与者。

然而，目前市面上生产的黄嘌呤氧化酶活性免疫检测试剂盒仍然存在一些不足：(1)在样品前处理方面，待测的生物组织或细胞试样，均需进行低温破碎和提取操作，破坏了生物组织或细胞结构的完整性；(2)在试剂盒配制方面，需采用化学合成类试剂，不属于绿色环保类。

基于上述问题，本发明利用从实验室提取分离出的天然小分子化合物，与黄嘌呤氧化酶产生的特殊生物化学反应，发现在某处波长表现出较强的特征吸收峰。该吸收峰响应值与酶活力浓度具有较好的线性关系，能够较好地评价XOD的生物活力。该天然小分子化合物不会对生物活细胞的结构完整性产生破坏，且具有较好的热稳定性，且无毒副作用，因此本发明提供了一种新型黄嘌呤氧化酶活性免疫检测试剂盒及应用。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明提供了一种新型黄嘌呤氧化酶活性免疫检测试剂盒，所述试剂盒由试剂1、试剂2和试剂3组成，其中：

试剂1为100ml缓冲液，其中包含乙二胺四乙酸钠和焦磷酸钠，pH＝7.2-7.5；

试剂2为黄嘌呤氧化酶标准品，粉末状；

试剂3为桑色素，浅黄色粉剂。

优选地，所述试剂2存储于棕色试剂瓶中，所述试剂3存储于工作液配制小瓶的EP管中，所述试剂1、试剂2和试剂3的保存条件均为4℃。

为解决以上技术问题，本发明还提供了一种新型黄嘌呤氧化酶活性免疫检测试剂盒的应用，所述试剂盒用于检测黄嘌呤氧化酶活性。

与现有技术(国内盖德化工黄嘌呤氧化酶试剂盒和武汉艾美捷与广州伟伯科技两公司进口售卖的黄嘌呤氧化酶试剂盒)相比，本发明的有益效果为：

1.从环保方面，本发明的新型黄嘌呤氧化酶试剂盒所含试剂均无毒无害，可直接用于生物活细胞中XOD活力评价，样品的形式及纯度要求也没有特别苛刻。且该试剂盒使用时，无需对待测样品进行细胞破碎和酶提，能较好地保持细胞结构的完整性，与此同时，天然小分子与XOD形成的结合物对XOD的活力没有影响，在细胞生物学领域具有潜在市场价值和科学应用价值。

2.从技术方面，新型XOD免疫检测试剂盒的检出限范围较广([XOD]：5-50mu/mL(5.2×10^-4-5.2×10^-3mg/mL))、工作曲线的线性关系较好，能达到R²0.98。检测时间大大缩短，只需常温(25℃左右)反应15min即可检测。检测试剂盒原料来源广泛，结构简单。

附图说明

图1为本发明的新型XOD免疫检测试剂盒基本设计思路；

图2为本发明桑色素与XOD特异性结合后的紫外吸收特征峰；