[发明专利]一种检测细胞DNA含量的方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种引物和探针组合物，其特征在于：包括3套引物和探针，分别为：

根据MDCK细胞全基因组DNA设计小片段的正向引物XF1、反向引物XR1和探针XP1,其核苷酸序列依次为序列表中SEQ ID NO:1-3所示；

根据MDCK细胞全基因组DNA设计中片段的正向引物ZF1、反向引物ZR1和探针ZP1,其核苷酸序列依次为序列表中SEQ ID NO:4-6所示；

根据MDCK细胞全基因组DNA设计大片段的正向引物DF1、反向引物DR1和探针DP1,其核苷酸序列依次为序列表中SEQ ID NO:7-9所示；

所述探针XP1、ZP1和DP1的两端分别标记有荧光基团和淬灭基团，所述荧光基团为FAM，所述淬灭基团为Eclipse，并且与扩增片段的中间部分序列同源。

2.一种MDCK细胞DNA的检测方法，其特征在于：

所述方法包含参与反应的权利要求1所述的引物和探针组合物；还包括以下步骤：

核酸提取：提取待测样本的DNA；

制备反应体系：制备40µL定量PCR反应体系，包括DNA、dNTP混合物、Mg2+离子、Taq DNA聚合酶、正向引物、反向引物、探针、10×PCR Buffer和MDCK细胞DNA标准品，余量为水；

反应过程：包括95℃预变性5分钟；95℃变性15秒、60℃退火延伸90秒，40个循环；

结果检测：包括实时荧光信号判读、绘制标准曲线；

所述方法不用于疾病的诊断与治疗。

3.根据权利要求2所述的MDCK细胞DNA的检测方法，其特征在于：3套所述的引物和探针组合物分别设置在3个单独的PCR扩增管中独立进行所述MDCK细胞DNA的检测。

4.根据权利要求2所述的MDCK细胞DNA的检测方法，其特征在于：所述反应体系中，各组分的使用浓度或用量为2.5mM dNTP混合物4µL、50mM Mg2+离子2µL、4U Taq DNA聚合酶0.4µL、正向引物和反向引物终浓度为15uM，探针终浓度为10uM、10×PCR Buffer取 4µL、MDCK细胞DNA标准品10µL，余量用去离子水补足40µL。

5.一种MDCK细胞DNA的检测试剂盒，其特征在于：包含权利要求1所述的引物和探针组合物、标准品、阴性对照、Mg2+离子和DNA聚合酶。

6.根据权利要求5所述的MDCK细胞DNA的检测试剂盒，其特征在于：所述DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶，每40µL反应体系用量为1.6U、所述Mg2+离子的浓度为50mM，用量为2µL。

7.权利要求1所述的引物和探针组合物、或者权利要求2-4任一项中所述的MDCK细胞DNA的检测方法、或者权利要求5-6任一项中所述的MDCK细胞DNA的检测试剂盒，在检测MDCK细胞DNA含量和大小分布中的应用。