[发明专利]一种塞内卡病毒A空衣壳及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种塞内卡病毒A(Seneca virusA,SVA)空衣壳的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)塞内卡病毒A空衣壳的制备

1)将细胞悬液加入细胞培养瓶中，在37℃、5％CO2细胞培养箱中培养，待细胞长至80-90％时，换成2％胎牛血清培养基，按体积比1:100接入塞内卡病毒A病毒液，继续放置在培养箱中培养，在SVA感染细胞达8h时加入10mM盐酸胍，继续培养，当细胞感染达到90％时，收毒，得到含有SVA空衣壳的细胞液，-80℃冰箱待用；

2)灭活、浓缩

细胞液反复冻融三次，加入灭活剂，150rpm/min摇床摇晃28h，加入阻断剂，并检验是否灭活完全；灭活后的细胞液6000rpm/min离心30min，取上清液按照sartorius Vivaflow200产品说明书进行浓缩，浓缩液再10000rpm/min离心30min，取上清液超速离心机40000rpm/min离心2h，沉淀用1％Trition-100PBS研磨分散，4℃过夜后，10000rpm/min离心30min，收集上清液，加入等体积的三氯乙烯去脂，8000rpm/min离心30min，收集上清液；

(2)SVA完整病毒粒子及空衣壳分离

利用Gradient Station^TM梯度制备仪(Bio Comp Instrument)制成10％-50％w/w氯化铯密度梯度，加入步骤2)得到的上清液230000g离心2.5h，获得纯化的塞内卡病毒A空衣壳。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述的细胞为猪肾细胞系(IBRS-2)，所使用的培养基为含10％胎牛血清、100U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的细胞培养液Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium–high glucose。

3.按照权利要求1或2所述的制备方法制备得到的塞内卡病毒A空衣壳。

4.权利要求3所述的塞内卡病毒A空衣壳在制备塞内卡病毒A疫苗中的用途。